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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
2年
- 英文名：
B16-Fo细胞
- 库存：
10000
- 供应商：
上海信裕
- 保存条件：
37度
培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml 冻存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清2ml。 依次比例酌量配置。 超净工作台常规配置 移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个， 常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，保种管 所需试剂：gibco高糖培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精…… 实验前准备： 所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭鼠黑色素瘤细胞系工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。 首次传代前细胞的复苏，首先用一大烧杯盛满37℃的温水放于液氮罐旁边，待细胞株取出后留上端1/3于37℃水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。若种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。这一过程可在超净工作台外操作。
细胞培养应注意的问题：
细胞培养过程中，从实验室的设计到实验过程中的操作，都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻，所以无论从实验室的设计，还是使用的物品及细胞培养的操作过程，都要注意保持无菌环境。
冷冻保存细胞之方法：
冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30~60分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。 冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放鼠黑色素瘤细胞系入液氮槽vaporphase长期储存。*-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度：
冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial，融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
应如何避免细胞污染：
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
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文献和实验B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的，不过中科院说不清，我也就说不清了。总之是B16。细胞总的来说比较好养，操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养，一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了，细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青，感觉不灭活比灭活要好养一些。传代操作，主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养，但是及时换液，否则也很容易死亡、或变形。消化用胰酶0.25%，可以用含EDTA的，效率更高一点。消化步骤：弃血清——用D-hank's
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