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小肠结肠炎耶尔森氏菌

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      2年

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    • 供应商

      上海信裕

    • 保存条件

      37度

    小肠结肠炎耶尔森氏菌培养操作步骤:
    培养基的配置:基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml 冻存液的配置:DMSO18ml+胎牛血清2ml。 依次比例酌量配置。 超净工作台常规配置 移液器1套(2.5μl、20μl、200μl、1ml),酒精灯1盏,液器1台,斜架1台,酒精喷壶1个,酒精棉球缸1个,污缸1个, 常规耗材:培养瓶(50㎝2),定量移液管(5ml、10ml),枪头(1ml、200μl、10μl),培养皿,6/24/48/96孔板,医用脱脂棉球,保种管 所需试剂:gibco高糖培养基,胎牛血清,双抗,DMSO,胰酶,苯扎溴氨,75%酒精…… 实验前准备: 所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内,用酒精喷壶喷洒实验台面,并关闭工作小肠结肠炎耶尔森氏菌台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。 首次传代前细胞的复苏,首先用一大烧杯盛满37℃的温水放于液氮罐旁边,待细胞株取出后留上端1/3于37℃水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。若种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。这一过程可在超净工作台外操作。
    细胞培养应注意的问题:
    细胞培养过程中,从实验室的设计到实验过程中的操作,都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻,所以无论从实验室的设计,还是使用的物品及细胞培养的操作过程,都要注意保持无菌环境。
    冷冻保存细胞之方法:
    冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30~60分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。 冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vaporphase长期储存。*-20°C不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡小肠结肠炎耶尔森氏菌,亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
    细胞欲冷冻保存时,细胞冷冻管内应有多少细胞浓度:
    冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial,融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
    应如何避免细胞污染:
    细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
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    • 耶尔森氏菌及检验

      耶尔森氏菌属包括11个种,其中对人有致病性的有三种:小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核和鼠疫。只有小肠结肠炎耶尔森氏菌和假结核已确定是食源性病原体。鼠疫耶尔森氏菌引起黑疽病,不通过食品传染。   1981年根据DNA以及生化和形态特征的相关资料,与小肠结肠炎耶尔森氏菌极为密切3个同源群被作为耶尔森氏菌的新种命名,它们是弗氏耶尔森氏菌(Y·frederiksenii)、中间型耶尔森氏菌

    • 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)

      成分   磷酸氢二钠(Na2HPO4         8.23g   磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)       1.2g   氯化钠(NaCl)             5.0g   三号胆盐               1.5g   山梨醇                20g 制法   将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中,再加入三号胆盐及山梨醇,溶解后校正pH为7.6,分装试管,于121℃高压灭菌15min,备用。  

    • 巴氏杆菌属(Pasteurella)

        分类地位未定的 1属。为无芽孢,不运动,兼性厌氧,菌体两端常染色浓重的革兰氏染色阴性小杆菌。因 1880年巴斯德氏首先自病鸡分离到本属中的多杀巴氏杆菌而得名。鼠疫杆菌、假结核杆菌、肠道结肠炎杆菌和土拉杆菌原归本属,现前三者改归耶尔森氏菌属,最后一种改归弗朗西斯氏菌属。本属已确定的种有多杀巴氏杆菌、嗜肺巴氏杆菌、溶血巴氏杆菌、尿巴氏杆菌和鸭疫巴氏杆菌等。它们的生物学性状见表。     本属菌体大小( 0.3~ 0.5)×( 1.0~

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