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文献和实验不变。对固定角式,小角度转头及垂直管转头,离心头沉降距离很微短,而在离心后复原时这项距离明显拉长了,也就是说梯度曲线变得平缓了,这种距离的延伸右利于离心分辨率的提示。因此垂直管转头比NVT(近垂直管)转头,NVT转头比角式转头的距离延伸更大,分辨率也就更高。但与此相反,纯样品带的宽度都是甩平转头最窄,垂直管转头最宽。 *梯度中的最大和最少少密度: 计算前,首先要找到等密度点的位置等密度点:离心层密度与率心开始时初始密度相等的点。 对于甩平转头:设等密度点少rc 式中 rt:梯度表面与旋转中心距离
含量在40%-60%; 引物之间的TM相差避免超过2℃; 引物的3’端避免使用碱基A; 引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基。 为避免基因组的扩增,引物设计最好能跨两个外显子。2.2 Taqman 探针设计 一般设计原则: 探针位置尽可能地靠近上游引物; 探针长度通常在25-35bp,Tm值在65-70℃,通常比引物TM高5-10℃,GC含量在40%-70%。 探针的5’端应避免使用碱基G。 整条探针中,碱基C的含量要明显高于G的含量。 为确保引物探针的特异性,最好
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