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- 保质期:
1年
- 库存:
10000
- 供应商:
上海信裕
- 保存条件:
室温保存
产品包装:试剂盒组成 D1800-50 D1800-100 储存条件
RNase A 1ml 2ml -20℃
蛋白酶K 1ml 2ml -20℃红细胞裂解液 120ml 120ml×2 RT
溶液A 15ml 2 5ml RT溶液B 15ml 25ml RT
漂洗液 15ml 15ml×2 RT洗脱液 15ml 30ml RT通用T载体菌落PCR鉴定试剂盒
吸附柱 50个 100个 RT收集管 50个 100个 RT说明书 1份 1份 RT
注意事项:
1、本试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出通用T载体菌落PCR鉴定试剂盒现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物的全血如人全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20ul,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的 pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率。
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文献和实验调节电压为 20V (小槽)或 40V (大槽),电泳 15min ,使细胞充分裂解,将电压调高到 200V ,继续电泳 1hr ,照相。 7 .根据胶图粗略鉴定插入片段的大小及小片段率。 2 .菌落 PCR 1.取适量PCR薄壁管,置于冰上,每管先加入17.3ul的灭菌水。 2.用灭过菌的10ul小枪头挑取单克隆白斑至灭菌水中, 振荡混匀。 3.依次加入
。 6.调节电压为20V(小槽)或40V(大槽),电泳15min,使细胞充分裂解,将电压调高到200V,继续电泳1hr,照相。 7.根据胶图粗略鉴定插入片段的大小及小片段率。 2 .菌落 PCR 1.取适量PCR薄壁管,置于冰上,每管先加入17.3ul的灭菌水。 2.用灭过菌的10ul小枪头挑取单克隆白斑至灭菌水中,振荡混匀。 3.依次加入: 10xbuffer 2.5
产物两端的酶切位点在不在; 2,筛选阳性克隆时,不管是菌落PCR还是质粒酶切,由于片段与太大,都不好去判断。建议:如果是PCR鉴定,则可以在中间设计一条引物,与目的载体的一条通用引物进行配对,扩增出来的大小为1k左右,这样便于判断。如果采取酶切方法鉴定,建议在片段中选取内切酶,只要切出来的大小符合我们理论上的要求即可; 3,克隆时阴性对照非常重要。 希望对你有帮助 wangch84 todolphin_705_200再次感谢你的回答。
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