人铁调素25(Hepc25)ELISA试剂盒

在现在的人铁调素25(Hepc25)ELISA试剂盒商品试剂盒中，血清样本的加入几乎是唯一的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意避免以下几点：加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要。滴加太快易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。故有时一份标本用相同的试剂盒两次测定结果不同，往往是上述加样及试剂的错误所致。
温育是人铁调素25(Hepc25)ELISA试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。ELISA作为一种固相免疫测定，必须在一定的温度条件下反应一定的时间，且温育所需时间与温度成负相关性。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。 目前ELISA商品试剂盒，国产反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口试剂盒为37℃ 1～2小时才能较完全的结合。温育实际测定操作中要注意以下几点：
1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。在临床实验室中，通有将微孔板一放入温箱即开始计时，造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来 。南方冬季室内温度较低应特别注意，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性［3］。为保证37℃下足够的温育时间，可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱所需时间孔内温度才能达到37℃，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
2）温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间最为完全。建议在临床人铁调素25(Hepc25)ELISA试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
3）“边缘效应”的排除。“边缘效应”指外周孔显色较中心孔深，原因为96孔板周孔与中心孔表面热力学梯度不同。使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可排除“边缘效应”，且可提高测定重复性。 总而言之，尽量采用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中。这样因板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触，水浴箱或湿盒内的高温度使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
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