植物病原体检测试剂盒--prime diagnostics

植物病原体类型与监测——Prime Diagnostics
Prime Diagnostics介绍
Prime Diagnostics提供多达150种植物病原体的检测产品，如病毒、细菌、真菌和类病毒。
用户可根据自身需求，来选择植物病原菌检测试剂盒的类型——选择现场检测或实验室检测；简单检测单一病原体还是同时检测多种病原体。
Prime Diagnostics提供有效的植物疾病诊断解决方案，其拥有自己的现代化实验室和抗体研发机构，与农业部门和知名研究机构紧密合作，始终紧扣市场需求，所有产品质量可靠，性能卓越。

产品类型

1. 单一病原体的实验室检测产品

病毒性病原菌检测，采用的是DAS-ELISA方法。
细菌性病原菌检测，多采用的是IIF（间接法免疫荧光），部分采用IF或DSA-ELISA法

2. 多种病原体的实验室检测产品

Prime Diagnostics有两种多重检测产品线，第一个为Luminex xMAP，基于蛋白的检测系统。第二个为基于DNA或RNA的检测系统。
(1) LuminexxMAP®多重检测
Luminex Xmap——基于颜色编码顺磁微球的多重检测系统
特异的抗体与这些顺磁微球结合，病毒或是细菌等植物病原体与之结合。激光分析器检测与病原体结合的荧光标记二抗。这一技术能同时有效检测多达百种病原体。
使用Flexmap 3D analyzer，LuminexxMAP®可同时分析多达500个参数。通过组合不同的特异抗原，Prime Diagnostics提供多种不同的组合方式用于多重分析，Prime Diagnostics的Luminexx MAP®试剂盒卓越性能已经检测证实。
样品中的病原体在微球表面实现检测：微球添加入96孔板的样品中，每一种微球特异性结合其特异的靶标分子（抗体），加入二抗，经结合标记，分析仪上检测，分析仪通过分析样品内部染料确定微球。
该多重检测技术省时省力。
原理
xMAP技术基于聚苯乙烯微球或是柱子。其根据颜色的编码特异辨认每种微球。
结合一个病原体的抗体与特异柱子结合，生成特异的抗体结合柱。
这些特异组合组在一起，在单一样中检测一组不同的病原体。
连接抗体结合病原体，没有相应病原体的话，则没有东西结合上来。
加入荧光探针连接的二抗，由柱子、病原体和抗体形成的三明治，经分析仪分析获取。



(2) LuminexMagPlex-TAG®多重检测系统
为了检测植物真菌、细菌、病毒和类病毒的DNA或RNA，Prime Diagnostics选择了基于靶标特异性引物延伸(Target Specific Primer Extension, TSPE)方法。TSPE将PCR与Luminex MagPlex-TAG®的多重检测能力结合，旨在在免疫检测不适合或应用受限的情况下检测病原体DNA/RNA。
TSPE方法由如下步骤：
1) 样品材料的DNA提取
2) 使用靶标特异的引物系列经PCR扩增基因组DNA或RNA
3) 通过TSPE反应进行PCR产物纯化，在此过程中生物素标记的dCTPs (biotinylated dCTPs)掺入新聚合的DNA链中。每一个TSPE引物携带有特异的MagPlex-TAG®，这种标签可与结合在特定Luminex柱子上的抗标签(anti-tag)特异性结合。
4) TSPE 产物通过与抗标签特异性退火而结合在微球上。
The TSPE products are uniquely annealed to the microspheres through the specificity of the MagPlex-TAG®/ ‘anti-tag’ recognition.
5) 之后，生物素标记的dCTPs由链亲和素(streptavidin)连接的荧光报告染料标记。在检测时，Luminex通过微球末端的染料确定每一微球，记录链亲和素相关报告染料的强度。通过特异的TSPE产物同时确定多种不同柱子，从而使Luminex MagPlex-TAG®s系统成为真正的多重检测平台。
其流程如下：

产品：
Fusarium 镰刀菌 Luminex MagPlex-TAG® kit
Phytophthora 疫霉属 Luminex MagPlex-TAG® kit
Viroids and Viruses 类病毒和病毒 Luminex MagPlex-TAG® kit

3. 单一或多种病原体的现场检测产品

现场检测，随身携带的诊断技术。
Pocket®Diagnostic LFD装置的注册商标为Forsite Diagnostics，直接在田间地头、温室，也可在实验室中或任何需检测的地点使用。Pocket®Diagnostic基于侧向流动免疫色谱层析技术，用于检测样品中某单一病原体。
方法：
只需0.2 g或25 mm见方的小片植物叶片材料即可，如有可能，使用呈现症状的组织，不要使用死组织；植物的根则事先洗净土壤。组织在提取瓶中剧烈震荡30-60秒，直到提取缓冲液不再完全透明。
滴2到3滴裂解液到样品检测池上，在确认对照线(C)变为蓝色后（说明工作正常），判断检测线(T)颜色来确定是否含相应病原体。