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- 2025年06月21日
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低温
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详询
- 英文名：
Fok I
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详询
- 供应商：
biorbyt
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500 Units
产品名：Fok I
货号：orb93991
产品中文名：Fok I
产品详情链接：https://www.biorbyt.com.cn/fok-i-orb93991.html
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文献和实验一、PCR产物用各种限制性核酸内切酶酶解 将PCR扩增产物分装，并用下列不同的限制性核酸内切酶酶切 DR1 ：Ava II，Pst I DR2 ： Fok I，Sau 96，HpH I DR3 、8、11、12、14： Ava II，Fok I，Kpn I，Hae II，Sau96，SfaN I，Sac II，Apa I （1）将8ul PCR扩增产物与1ul相应的酶切缓冲液混合。 （2）取1ul相应的核酸内切酶（含1~2单位
【交流】哈佛大学实验室发现CRISPR/Cas9存在严重脱靶效应
性非常低。实验结果还表明，在体外和细胞中gRNA的活性和特异性是需要权衡的，长度短的gRNA比长度长的gRNA特异性更高，而活性却是相反的。研究人员还发现，gRNA:Cas9混合物浓度的提高会提高Cas9的切割活性，但是进一步降低了gRNA:Cas9混合物打靶的准确性，包括会在PAM附近引起突变，从而增强脱靶效应。背景介绍：目前最常用的基因修饰技术有ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9。ZFN由一系列锌指蛋白和Fok I非特异性核酸内切酶构成，两个ZFN分别结合到靶序列后，激活Fok
指的DNA结合特异性，骨架结构保守。对决定DNA结合特异性的氨基酸引入序列的改变可以获得新的DNA结合特异性。根据目的基因设计8-10个锌指结构域并与FokⅠ核酸内切酶结合可构成靶向特定位点的ZFNs，在FokⅠ切割域的二聚化作用下完成对目的基因的编辑。 TALEs蛋白包括三部分：N端序列、C端序列、由高度保守的重复单元组成的中心重复区。每个重复单元中除12、13位氨基酸（repeat varible di-residues，RVDs）可变外其余几乎相同，RVD与A、T、C、G之间有着严格的对应
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