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人ⅡD组磷脂酶A2(PLA2G2D)ELISA试剂盒

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  • 2025年08月24日
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    人ⅡD组磷脂酶A2(PLA2G2D)ELISA试剂盒试剂盒组成
    1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
    2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(160ng/mL) 0.5ml×1瓶
    3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
    4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
    5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
    6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
    标本要求
    1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
    2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
    人ⅡD组磷脂酶A2(PLA2G2D)ELISA试剂盒操作步骤
    1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
    80ng/mL 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
    40ng/mL 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
    20ng/mL 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
    10ng/mL 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
    5ng/mL 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
    1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
    2. 温育:人ⅡD组磷脂酶A2(PLA2G2D)ELISA试剂盒用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
    3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
    4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
    5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
    6. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
    7. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    8. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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    • ELISA实验步骤一览表

       每凹孔加入0.2ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本,37℃作用1~2小时。  分2组,a加酶标记抗原和被检抗原混合液0.2ml,另一组只加酶标记抗原液0.2ml,37℃作用1~2小时。(混合液可作成不同稀释度)。  a加参考抗体和被检抗原混合液0.2ml,另一组加参考抗体与等量稀释

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