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- 2025年07月13日
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完整的小鼠含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)ELISA试剂盒包含以下各组分：已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；酶标记的抗原或抗体（结合物）；ELISA试剂盒酶的底物；阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考尺度品和控制血清（定量测定中）；酶联物（结合物）及标本的稀释液；洗涤液；酶反应终止液。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。疫吸附剂已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的前提下一般可保留6个月以上。可作ELISA中载体的材料良多，最常用的是聚苯乙烯。ELISA试剂盒以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体，反应后用磁铁的吸引进行分离，洗涤利便，ELISA试剂盒一般均配以特殊仪器。为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣，可应用如下的试验：用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的ELISA操纵步骤进行测定，然后比较结果。小试管还可以当作比色杯，小鼠含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)ELISA试剂盒最后直接放入分光光度计中比色。间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大进步，因此含杂质较多的抗原也可采用捕捉包被法，试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的机能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍留存原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用力。控制反应前提，使各孔读数在吸光度0.8左右。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。例如，在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。换言之，包被等于抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大，这种载体就是这一ELISA测定项目的最合适的固相载体。ELISA载体的外形主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。良好的ELISA板应该是吸附机能好，空缺值低，孔底透明度高，小鼠含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)ELISA试剂盒各板之间、统一板各孔之间、统一板各孔之间机能相近。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于最佳反应状态，因此珠式ELISA的反应往往更为敏捷。IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联结多发生在Fc段上，抗体结合点暴露于外，因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。
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文献和实验为水溶性。曾有报道OPD有致异变性，操作时应予注意。OPD见光易变质，与过氧化氢混合成底物应用液后更不稳定，须现配置现用。在试剂盒中，OPD和H2O2一般分成二组分，OPD可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助溶剂，使用更为方便。过氧化氢则配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓缩液，使用时用蒸馏水稀释。先进的ELISA试剂盒中则直接配成含保护剂的工作浓度为0.02% H2O2的应用液,只需加入OPD后即可作为底物应用液。TMB经HRP作用后共产物显蓝色，目视对比鲜明。TMB性质较稳定，可配成溶液
域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FCM流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。 样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。
物种蛋白同源性比对。如果比对结果，证明同源性比较高的，也可以选择。 （3）分析样本中的蛋白质的结构性质 了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑： 待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FCM
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