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- 2025年07月08日
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完整的小鼠M2-型丙酮酸激酶(PKM2)ELISA试剂盒包含以下各组分：已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；酶标记的抗原或抗体（结合物）；ELISA试剂盒酶的底物；阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考尺度品和控制血清（定量测定中）；酶联物（结合物）及标本的稀释液；洗涤液；酶反应终止液。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。疫吸附剂已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的前提下一般可保留6个月以上。可作ELISA中载体的材料良多，最常用的是聚苯乙烯。ELISA试剂盒以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体，反应后用磁铁的吸引进行分离，洗涤利便，ELISA试剂盒一般均配以特殊仪器。为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣，可应用如下的试验：用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的ELISA操纵步骤进行测定，然后比较结果。小试管还可以当作比色杯，小鼠M2-型丙酮酸激酶(PKM2)ELISA试剂盒最后直接放入分光光度计中比色。间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大进步，因此含杂质较多的抗原也可采用捕捉包被法，试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的机能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍留存原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用力。控制反应前提，使各孔读数在吸光度0.8左右。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。例如，在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。换言之，包被等于抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大，这种载体就是这一ELISA测定项目的最合适的固相载体。ELISA载体的外形主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。良好的ELISA板应该是吸附机能好，空缺值低，孔底透明度高，小鼠M2-型丙酮酸激酶(PKM2)ELISA试剂盒各板之间、统一板各孔之间、统一板各孔之间机能相近。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于最佳反应状态，因此珠式ELISA的反应往往更为敏捷。IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联结多发生在Fc段上，抗体结合点暴露于外，因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。
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文献和实验果糖才是肥胖的真凶？Nature 最新文章揭示高果糖饮食如何
，丙酮酸与磷酸烯醇丙酮酸（PEP）的比例显著降低，与丙酮酸激酶的抑制效果一致。此外，PKM2 在缺氧组织中的表达很高，例如肿瘤和肠绒毛等。图片来源：Nature果糖主要由糖转运蛋白 GLUT5 转运到肠细胞中，然后被 KHK 磷酸化形成 1-磷酸果糖（F1P）。由于 F1P 在结构上类似于 PKM2 的内源性调节因子 1,6-二磷酸果糖（FBP），因此作者假设 F1P 可能直接抑制 PKM2 的活性。研究发现，F1P 会与 FBP 竞争结合 PKM2 的同一位点，而且一旦结合就能够直接抑制 PKM2
Redox Biol：华中科技大学同济医学院黄恺团队揭示这个抑癌基因在肥胖中的关键作用
Biology 2. FBW7 介导 PKM2 的泛素化和降解 接下来，通过质谱技术分析了高脂饲养后小鼠腹腔巨噬细胞的差异表达蛋白，发现 PKM2（丙酮酸激酶 M2）在肽命中列表中得分最高。排除 FBW7 缺陷对 PKM2 转录水平的影响后，筛选得到 Ser37（第 37 位丝氨酸），位点突变后证明 FBW7 通过 Ser37 介导 PKM2 的泛素化。图片来源：Redox Biology 3. FBW7 通过巨噬细胞中的 PKM2，转移糖酵解以抵抗氧化应激 研究人员分析了糖酵解代谢产物的水平，FBW7
的假阳性极低，可能成为有价值的肝癌标志物。 ④血清岩藻糖苷酶(AFu)：AFu属溶酶体酸性水解酶类，主要生理功能是参与岩糖基的糖蛋白、糖脂等生物活性大分子的分解代谢。AFu超过110Kat/L应考虑原发性肝癌，国内报道AFu诊断原发性肝癌的阳性率为81.2%，对AFP阴性肝癌和小肝癌阳性率分别为76.1%和70.8%，继发性肝癌、良性肝占位病变均阴性，但肝硬化、慢性肝炎的假阳性较高。 ⑤M2型丙酮酸激酶(M2-PyK)：丙酮酸激酶(PyK)是糖酵解中的关键酶，有L，R，M1M2(k)型4种
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