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- 2025年12月10日
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OPD HCl (O-Phenylenediamine dihydrochloride)
OPD HCl
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文献和实验操作篇：western blot 之 SDS－PAGE 电泳
20-50μl 蛋白（注意：根据自己的实验需要进行选择，没有固定的量）的溶液体积即为上样量。 取出上样样品至 200μl 的 EP 管中，加入 5×SDS 上样缓冲液至终浓度为 1×。（上样总体积一般不超过 15μl，加样孔的最大限度可加 20μ 样品，其实大一点的垂直电泳槽每孔最大上样量可以达到 40μl，胶做得很好的话 50μ 也是问题不大的）上样前要将样品于沸水中煮 5-10 min 使蛋白变性。 本人心得：可以使用 PCR 仪进行变性，加快速度，这样就不用将水煮
某基因的序列如下，我设计了一对引物，5 TCGGTTTTCACTGGTTCTCATCC 3 3 T CGCACTCCTTTCTCTCGCAATG 5 想扩增的目的片断是3629－4799 （1170 bp，）不知道能否，请大侠们帮忙看一下， 3601 ttttttaatt tcaggatatg gagcttcttc ggttttcact ggttctcatc cagtcctggc 3661 tgaccccagt gcaataccta agcaaggtgt ttacaaacaa
1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低;而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起
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