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96T/48T
海信裕生物科技有限公司悄悄告诉你：使用ELISA试剂盒要的四个方面。
第一、看似无聊实则重要的洗涤： 如果未结合的材料残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。有必要的话，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。
第二、关键的封闭：封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不充分，那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和人含杆状病毒IAP重复蛋白6(BIRC6)检测试剂盒。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。最常用的非离子型去污剂是Tween-20（恒远生物的吐温-20第二季度的新货已经上市啦，需要的来电咨询哦！）。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度，它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。蛋白封闭液则有所不同，是永久的。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白（BSA）、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过，它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。
第三、抗体浓度须优化： 如果试剂稍有不同，则可能需要优化抗体的量。非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。
第四、检测试剂要适量：切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高，或者未正确稀释，则会导致高背景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。如果您的人含杆状病毒IAP重复蛋白6(BIRC6)检测试剂盒不幸地遇到了高背景，那么也无需太担心，依次查看ELISA系统中的组分，并排除可能存在的问题。悉心优化，相信很快就会有漂亮的结果。
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文献和实验【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统，影响蛋白表达的因素？
不知道有多少人成功用杆状病毒——昆虫细胞表达系统成功进行过蛋白表达？我最近表达一段病毒的非结构蛋白nsp-6，构建的重组Bacmid质粒经PCR鉴定正确，可是进行表达时，却未见蛋白表达，同时进行的试剂盒对照（含CAT基因的重组细胞中则有较好的表达。 我听说约有70%的蛋白在原核表达系统中是不表达的，但不知道这样的情况会不会发生在我用的昆虫细胞表达系统，除了实验操作失误方面的原因，还有什么因素是不使蛋白表达的，请大家讨论一下。 下面是我的实验过程，请高手指教，同时希望也给新手一个指导
这样一个问题： 某公司的激活-和转运检测试剂盒，监测是否激活NF-KB测试剂盒原理：NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物，分布在细胞浆中。在炎症因子、生长因子或趋化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情况下，IκB-α会在Ser32和Ser36被磷酸化，随后被泛素-蛋白酶体途径降解。NF-κB和IκB-α解聚后，其核定位序列被暴露，从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。通过免疫染色检测NF-κB的主要亚基p65是否被转移到细胞核内，就可以判断NF-κB是否被激活.本NF-κB
抗原（或抗体）的浓度。操作过程中颇为费时费力的是各步之间的洗板过程。虽然目前有自动化洗板仪器商供，但普通实验室通常并不置备。在小规模的实验（如只有一块酶联板）中，手工向各反应孔中加入洗液（含0.05% Tween的PBS缓冲液）尚可行。但如有较大规模（如5-10块酶联板）实验，即使使用多道移液器吸加洗液也很易使人疲劳。本文以使用商业试剂盒检测人IL6和自行检测小鼠血清中抗体为例，介绍ELISA的一种简便操作方法。人IL6检测试剂盒为eBioscience公司（San Diego, CA, USA
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