nalgene梯度降温盒，程序降温盒

细胞冻存的程序降温盒的使用注意事项

醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理论上是5次以后更换异丙醇，但是异丙醇对环境有害，我们可以多用几次，只是少了的时候要加满。还有冻存液里面的DMSO 对细胞有毒性，尤其是室温的时候，所以冻存盒和冻存液先放4°，等把细胞用冻存液重悬好了放在冻存盒里，还放回4°，等到出细胞间的时候再拿到-80°里面保存。过夜再转入液氮。 程序降温盒这个梯度降温可大大提高细胞冻存的存活率，由于程序降温盒内存在100%浓度的异丙醇和泡沫内衬，因此程序降温盒也可以用于细胞复苏。

细胞的冻存与复苏

推荐使用程序降温盒，分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放入-80℃冰箱过夜； 7、 如没有程序降温盒，则按下列顺序依次降温：室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存，注意转移过程中要保冷，避免产生温差或冻存管融化； 8、 从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。   注意事项： 1、 DMSO配制的时候会放热，一定要等冻存液冷却后使用，避免灼伤细胞； 2、 细胞离心后尽量吸干净上清液，减少培养基残留，避免稀释冻存液； 3、 不建议手动梯度降温，温度不稳定，容易

来来来，大神教你如何冻存细胞，里面窍门可多啦~

g，5 分钟)。2．去上清液，加入含 20% 以上小牛血清的完全培养基或血清，于 4℃ 预冷 15 分钟后，加入 10% 的 DMSO，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，分装于细胞冻存管，细胞浓度为 3×106～1×107 /ml 之间。3．将上述细胞分装于冻存管中，将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记 (日期、细胞种类及代次、冻存支数)。4．先将冻存管置入置于 4℃ 30 min，再转入- 20℃ 2 h 后，再放入- 80℃ 冰箱冷冻过夜，次日保存到液氮罐中。目前更多使用程序降温盒