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- Qiagen
- 204163
- 2025年07月11日
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货号：204163
产品名称：QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (200)
描述：The supplied, ready-to-use master mix contains SYBR Green I dye, ROX passive reference dye, HotStarTaq DNA Polymerase, and a dNTP mix in an optimized buffer. The dNTP mix includes dUTP, allowing optional treatment with UNG. The UNG enzyme is provided separately. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.
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文献和实验REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度，需要摸索，从200nM到700nm等，设置不同浓度。3、每个引物浓度，从well 1到12设置4个样本，阳性cDNA 1和2，NTC以及H2O，做triplicate。4、若用ABI7000或7700，所有的PCR条件可设置成一致的，减少麻烦，当然，引物
度的检测手段对实验过程中的污染也非常敏感，我们也无法从单一孔中的扩增曲线来判断是否来源于污染还是来源于真实样本的扩增。这时，就需要阴性对照来监控和发现污染的发生。常用的阴性对照包括以下几种： 无模板对照 No Template Control, NTC 使用水代替定量 PCR 反应中的核酸，其它试剂照常加入，用于监控扩增反应体系中的污染。正常情况下，NTC 孔不会有扩增；当 NTC 出现扩增，则预示体系中有污染。在 SYBR Green 实验中，NTC 出现扩增也可能是来源于引物二聚体的形成
，这样可以节约反转录的试剂，cDNA可以多次使用，可用于检测稀有基因是否表达、从极少量细胞中定量检测特定mRNA的表达水平。 3）特异性引物： 最特异的反转录方法是用含目标RNA的互补序列的寡核苷酸作为引物，若PCR反应用二种特异性引物，第一条链的合成可由与mRNA3'端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的cDNA，导致更为特异的PCR扩增。 做 Real Time PCR时，用于SYBR Green I/Eva Green 法时的一对引物与一般PCR
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