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文献和实验相关专题 细胞冻存有两种方法:传统的方法是利用冷存管处于4℃、 -20℃、 -80℃保存,程序降温方法是利用程序降温盒设定程序由室温降低至-80℃,最后再放置到液氮槽中长期保存。程序降温盒的使用注意事项如下: 实验室虽然有程序降温冻存盒,但怎么使用一直都搞不明白,我觉得是不是应该把程序降温冻存盒先从-80度移到室温放一段时间(细胞刚开始还没冻的时候就是室温),然后把细胞放进去,再一起移到-80度
推荐使用程序降温盒,分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放入-80℃冰箱过夜; 7、 如没有程序降温盒,则按下列顺序依次降温:室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存,注意转移过程中要保冷,避免产生温差或冻存管融化; 8、 从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。 注意事项: 1、 DMSO配制的时候会放热,一定要等冻存液冷却后使用,避免灼伤细胞; 2、 细胞离心后尽量吸干净上清液,减少培养基残留,避免稀释冻存液; 3、 不建议手动梯度降温,温度不稳定,容易
g,5 分钟)。2.去上清液,加入含 20% 以上小牛血清的完全培养基或血清,于 4℃ 预冷 15 分钟后,加入 10% 的 DMSO,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,分装于细胞冻存管,细胞浓度为 3×106~1×107 /ml 之间。3.将上述细胞分装于冻存管中,将盖子盖紧,并标记好细胞名称和冻存日期,同时作好登记 (日期、细胞种类及代次、冻存支数)。4.先将冻存管置入置于 4℃ 30 min,再转入- 20℃ 2 h 后,再放入- 80℃ 冰箱冷冻过夜,次日保存到液氮罐中。目前更多使用程序降温盒
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