透析袋（MD10-14）14000D

荧光素FITC标记抗体的方法

等(1963)的透析标记法。1．Marsshall法(1)材料 抗体球蛋白溶液、0．5mol／L(pH9．0)碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1％硫柳汞水溶液、50ml小烧杯、4℃冰箱、电磁搅拌器、透析袋、玻棒、pH7．2或3．0的0．01mol／LPBS等。(2)方法及步骤①抗体的准备 取适量已知浓度的球蛋白溶液于烧杯中，再加人生理盐水及碳酸盐缓冲液，使最后免疫球蛋白浓度为20mg／ml，碳酸盐缓冲液容量为总量的1／10，混匀，将烧瓴置电磁搅拌器上(速度适当以不起泡沫为宜)5～10

抗体纯化方法介绍

铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置2小时。 将步骤e中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。 将步骤f中离心后的沉淀用1ml 0.01M PBS 溶解, 转移到MD 14000透析袋内，用0.01 M PBS进行透析，透析4次以上，每次至少1小时以上。 2.正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法该纯化方法原理是：正辛酸在偏酸条件下，能与抗血清中或者小鼠腹水中的杂蛋白结合，在等电点附近将其沉淀，IgG类抗体则存在于上清液中，再利用饱和硫酸铵沉淀法即可进一步提纯。 具体

免疫共沉淀试剂配制及技术路线

，激酶或磷酸酯酶活性分析建议用2 h室温孵育； 13. 加入100μl Protein A琼脂糖珠来捕捉抗原抗体复合物，4℃缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温1h，如果所用抗体为鼠抗或鸡抗，建议加2 μl“过渡抗体”(兔抗鼠IgG，兔抗鸡IgG)； 14. 14000rpm瞬时离心5s，收集琼脂糖珠-抗原抗体复合物，去上清，用预冷的RIPA buffer洗3遍，800μl/遍，RIPA buffer有时候会破坏琼脂糖珠-抗原抗体复合物内部的结合，可以使用PBS；