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- 罗氏-11483188001
- 2025年11月26日
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First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV)
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30 reactions
RT-PCR第一条链cDNA合成试剂盒（AMV）
First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV)
General description
The First Strand cDNA Synthesis Kit is used for the synthesis of the first strand cDNA as the starting reaction for two-step RT PCR.The kit includes Reverse Transcriptase AMV for first strand synthesis, two different primers, our PCR Nucleotide Mix, and Control Neo pa RNA. PCR products that are generated by RT-PCR can be cloned using standard procedures.
The amplification of RNA requires the conversion of the RNA substrate into DNA. This is achieved through the use of a reverse transcriptase such as AMV RT (avian myeloblastis virus reverse transcriptase) or M-MuLV RT (moloney murine leukemia virus reverse transcriptase). The resulting cDNA can be used as a template for a standard PCR.
AMV RT synthesizes the new cDNA strand at site(s) determined by the type of the primer used:
• at the 3′-end of the poly(A) mRNA when Oligo-p(dT)15is used as a primer,
• at nonspecific points along the mRNA template when using the random primer p(dN)6, or
• at a site determined by a sequence-specific primer.
| 11483188001 | First Strand cDNA Synt. Kit fo第一链cDNA合成 | 1 kit (30 reactions) | |
| 11087789001 | Collagenase H, 2.5g, non-steri 胶原酶H | 2.5 g | |
| 11277049001 | Deoxynucleoside triphosphate S脱氧核苷三磷酸 | 4 x 10 µmol (4 x 100 µl) | |
| 11418432001 | Taq DNA Polymerase,5units/Ál(4 Taq DNA聚合酶 | 1,000 U (4 x 250 U) | |
| 11647687001 | Taq DNA Polymerase,1unit/Ál (4 Taq DNA聚合酶 | 1,000 U (4 x 250 U) |
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文献和实验合成 cDNA，产生 cDNA:RNA 复合物。该过程被称为第一链 cDNA 合成。如果存在 RNase H 活性（如野生型 AMV 和 MMLV 反转录酶），则 cDNA:RNA 复合物中的 RNA 会在第一链合成期间被切割。第一链 cDNA 可以直接用于 RT-PCR 等实验应用中，热稳定 DNA 聚合酶（如 Taq DNA 聚合酶）将复制 cDNA 的互补链。 在 cDNA 文库构建和测序中，将第一链 cDNA 作为模板，获得代表 RNA 靶标的双链 cDNA。这个过程被称为第二链cDNA 合成
液的结果相当于或优于先用反转录缓冲液合成 CDNA，然后 PCR 缓冲液进行 PCR 扩增循环。当然，值得注意的是 PCR 缓冲液并不最适合第一条 DNA 链的合成。我们对不同的缓冲液用于大片段 DNA 合成是否成功还没有进行过严格的研究。 反转录酶的选择似乎对实验方法成功与否并不十分重要。BRL 和BOEHRINGERMANN HEIM 的 MULV 反转录酶进行全面的研究，但没有理由认为来源可靠的反转录酶不能适用 于该方法。在研究中，我们仅使用了PERKINELMER/CETUS 公司生产
合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。SuperScriptⅡ逆转录酶，RNaseH- 的MMLV逆转录酶及ThermoScript逆转录酶，RNaseH- 的 AMV，比MMLV和AMV得到更多量和更多全长的cDNA（图3）。RT-PCR灵敏度会受cDNA合成量的影响
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