DIG-切口平移混合物

DIG-切口平移混合物

sufficient for 40 labeling reactions, pkg of 160 μL, suitable for hybridization

别名:
nick translation

一般描述

我们致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品为一种安全的化学品。 DIG系统是灵敏且具有成本效益的方案，可替代核酸放射性标记和检测。有许多已发表论文证明了DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交的DNA的唯一选择。
DIG-缺口平移混合物是用于缺口平移的方便的酶和核苷酸混合物。其利用DNA酶和DNA聚合酶的组合来切割DNA螺旋的一条链，然后在聚合酶检查或“校对”切口位点时掺入标记的核苷酸。大质粒、粘粒和聚合酶链式反应(PCR)片段都常用于该方法，同时DNA可以是线性化或超螺旋的。单个模板在标准的90分钟反应中可产生一致的结果，并且生成的平均探针长度为200bp，最多为500bp。调整di高辛配基(DIG)-11-三磷酸脱氧尿苷(dUTP)与三磷酸脱氧胸苷(dTTP)的摩尔比，以确保新合成的DNA中每20至25个核苷酸被DIG修饰。DNA中这一半抗原的密度可在免疫检测反应中产生最高的灵敏度。

特异性

热灭活：通过加入1 μl 0.5M EDTA（pH8.0),并加热至65℃10分钟来终止反应。

应用

DIG-缺口平移混合物用于生成高灵敏度的di高辛-11-dUTP标记原位杂交探针。
注意：该混合物也可用于过滤杂交技术，但是，对于高灵敏度的过滤杂交探针，我们建议您使用Roche Applied Science的DIG-High Prime。
对于使用其他半抗原和荧光团的非放射性标记原位探针，Roche Applied Science提供了Biotin-切口平移混合物和切口平移混合物（无核苷酸）。

质量

在点斑点检测中进行功能测试。

原理

切口平移法基于DNase I在MgCl₂存在下可以低酶浓度将随机分布的切口引入DNA的能力。
大肠杆菌 DNA聚合酶I使用切口的3′-OH末端作为引物，以5′→3′方向合成与完整链互补的DNA。DNA聚合酶I的5′→3′核酸外切活性可同时去除合成方向上的核苷酸。聚合酶活性可依次利用同位素标记的或半抗原标记的脱氧核糖核苷三磷酸对去除的核苷酸进行替换。在低温（+15℃）下，反应中未标记的DNA因此被新合成的标记DNA所取代。