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- 详细信息
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- 英文名:
FastStart SYBR Green Master
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需确认
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嵘崴达
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- 保存条件:
−20°C
- 规格:
500 X 20 μL REACTIONS
FastStart SYBR Green 预混剂
FastStart SYBR Green Master
Application
The FastStart™ SYBR® Green Master has been used in qPCR and two-step qRT-PC in the SYBR® Green I detection format. It is also used:
• in quantitative polymerase chain reaction (qPCR) for adeno-associated virus (AAV) titre quantification
• in qPCR to determine the expression level of different Col6a1-3 genes relative to glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)
• in quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) of G protein-coupled estrogen receptor-1 (GPER) mRNA
• in qRT-PCR for gene expression studies
Use the FastStart™ SYBR® Green Master with any real-time qPCR instrument other than the LightCycler® Instruments.
Features and Benefits
• 提高 PCR 灵敏度和特异性:
依靠这种混合物的 FastStart Taq DNA 聚合酶,通过热启动 PCR 最大限度地减少非特异性扩增产物的形成。
• 避免高估 qPCR 结果:
消除非特异性扩增产物和引物二聚体,增加结合定量的 SYBR Green I 的量。
• 扩增并检测广泛的 DNA 或 cDNA 靶标:
扩增长达 500 bp 的片段,包括富含 GC 或 AT 的片段。适用于 LightCycler ® 仪器以外的任何实时 PCR 仪器。
• 使用 LightCycler 以外的任何实时 PCR® 仪器:
从两种制剂中选择——一种含有 ROX 引用染料,另一种不含 ROX。
• 节省 qPCR 制备的时间和精力:
依靠这种易于使用的 2x 主混合物,无需混合组分,滴定 MgCl2 或执行其他耗时的优化步骤。
• 防止携带污染导致的假阳性:
混合物中含有 dUTP,因此可与尿嘧啶-DNA 糖基化酶配合使用,以消除先前 PCR 反应中携带的污染 DNA。
Components
FastStart SYBR Green Master,包含 FastStart Taq DNA 聚合酶、反应缓冲液、核苷酸 (dATP、dCTP、dGTP、dUTP) 和 SYBR Green I 的 2 倍浓缩预混液。
Quality
功能测试:使用三个模板对每批样本进行 qPCR 性能测试,即富含 GC 的模板、富含 AT 的模板和长模板(约440 bp)。
| 4673484001 | FastStart SYBR Green Master 5 荧光定量pcr酶 | 5 ml (4 x 1.25 ml) (for 200 reactions of 50 µl final reaction volume) |
| 11583786001 | DTT, 25g | 25 g |
| 10127825001 | HK/G6P-DH, 15 mg | 15 mg (5 ml) |
| 10223565001 | Histone 组蛋白 | 10 mg |
| 4738268001 | Expand HiFi PCR System dNTPack 高保真PCR酶 | 500 U (2 x 250 U) |
| 10810118001 | CHAPS, 10g | 10 g |
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度,需要摸索,从200nM到700nm等,设置不同浓度。3、每个引物浓度,从well 1到12设置4个样本,阳性cDNA 1和2,NTC以及H2O,做triplicate。4、若用ABI7000或7700,所有的PCR条件可设置成一致的,减少麻烦,当然,引物
相关专题 张驰宇1 ,2) , 张高红1 ,2) , 杨 敏1) , 贲昆龙1) 3 (1) 中国科学院昆明动物研究所 分子与细胞免疫学实验室,昆明 650223 ;2) 中国科学院研究生院,北京 100039) 摘要 为建立一种新的SYBR green Ⅰ实时定量RT-PCR 方法,使之能够有效消除引物二聚体(PDs)对实时定量结果的影响. 对RT-PCR 特异性扩增产物和PDs 分别进行了凝胶电泳检测和熔解
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