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- 2025年07月13日
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文献和实验Immunohistochemistry (IHC) of Thymus Frozen Sections
Materials Cold Acetone (-20ºC) in Coplin jars PBS, BenchKote paper, plastic lids Anti-digoxigenin-HRP diluent: 1% BSA in PBS (store 10 mL aliquots of BSA at -20ºC) Anti-rat-digoxigenin diluent: 5% Milk powder, 10% mouse serum, 10% goat
、5mmol/L MgCl2)管内，充分混匀；再加入B液40μl，轻轻混合即可。最好用前新鲜配制。 NBT即四唑氮蓝（Nitro-Blue-Tetrazolium）,MW=818,为深蓝色无定形微溶物质。BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚- 磷酸盐（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate）。当二者存在时，在碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase, AP）作用下，NBT被还原形成显微镜下可见的蓝色或紫色沉淀。 四、粘附剂 在免疫细胞化学工作中，由于标本
和抗羊等之分，特异性要与一抗匹配，否则，一抗和二抗连接有误可导致假阴性染色结果。例如，兔抗鼠或人的一抗需与抗兔的二抗匹配，小鼠抗大鼠或人的一抗需与抗小鼠的二抗匹配。目前，生物素化二抗多以即用型形式存在于SABC或SP免疫组织化学试剂盒中，故无需考虑其浓度。 9.SABC-POD或SABC-AP孵育 滴加稀释度合适(按说明书推荐的稀释度或预实验摸索)的ABC-POD或SABC-AP于切片上，室温孵育10~30分钟，随后PBS漂洗4次，每次5分钟。SABC或SP试剂盒中的即用
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