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- roche
- 罗氏 11888412001
- 2025年11月26日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
见产品外包装
- 英文名：
PCR Nucleotide MixPLUS
- 库存：
需确认
- 供应商：
嵘崴达
- CAS号：
见产品外包装
- 保存条件：
−20°C
- 规格：
2 X 100 μL
PCR 核苷酸混合物 PLUS
solution, Roche, pkg of 2 × 100 μL (10 mM each), suitable for RT-PCR
别名:
PCR | 核苷酸
一般描述
PCR 核苷酸混合物 PLUS 是一种无色澄清的 dATP、dCTP、dGTP 钠盐溶液，在水中浓度为 10 mM，dUTP 浓度为 30 mM，PCR 级。这种核苷酸混合物可以直接加入到聚合酶链反应中。
使用dUTP 代替 dTTP 进行掺入可降解来自先前尿嘧啶-DNA 糖基化酶 (UNG) 反应的污染 PCR 产物，以防止先前扩增的携带污染。
应用
- 这种即用型核苷酸混合物是 dATP、dGTP 和 dCTP 钠盐的预混溶液，每种浓度为 10 mM，dUTP 浓度为 30 mM，溶于水中。这种混合物经过优化，可用于所有类型的扩增反应：PCR
- RT-PCR
- 防止携带污染
为了去除 PCR 或 RT-PCR 的污染，用 dUTP 代替 dTTP 掺入 PCR 产物中。随后的反应可用尿嘧啶-DNA 糖基化酶 (UNG) 处理。为避免需要重新打开反应小瓶，将小瓶在+20°C下温育，从而降解潜在污染的含尿嘧啶的扩增产物。在该步骤中，模板 DNA 和 RNA 不受影响，因为正常 DNA 不含尿嘧啶，并且RNA 不作为 UNG 的底物。在开始实际的热循环程序之前，通过在 + 95°C 下孵育灭活 UNG。不耐热的尿嘧啶-DNA 糖基化酶尤其有用，因为在 + 95°C 下孵育 2 min 后已完全灭活。来自 大肠杆菌 的天然酶需要将反应混合物在 + 95°C 下孵育 10 min。短时间热处理可显著降低模板核酸流失的风险，模板核酸通常仅在低浓度下存在。这在进行 RT-PCR 时尤为重要。因此我们建议使用尿嘧啶-DNA 糖基化酶。
它已用于LightCycler PCR分析中，以鉴定鼻咽拭子中的百日咳博德特氏菌和副百日咳博德特氏菌。也已用于定量PCR（qPCR）分析。
特点和优势
PCR 核苷酸MixPLUS 可直接添加到扩增反应中。罗氏的PCR级核苷酸经过专门制造和纯化，具有最高的化学纯度。它们可用于扩增甚至少量的模板RNA和DNA。
提高产量和性能
- 选择一种方便即用型的4种核苷酸混合物。
- 获得最高的PCR和RT-PCR灵敏度。
- 坚持最高纯度 ( 99%) 的核苷酸
包装
1组包含4个即用型混合物
| 11888412001 | PCR Nucleotide MixPLUS (200 re PCR核苷酸 | 200 µl (2 x 100 µl) (for 200 reactions of 50 µl final reaction volume) |
| 10127230001 | L-LDH, (rabbit muscle), 10 mg L-乳酸脱氢酶 | 10 mg (2 ml) |
| 10411523001 | Luciferase from Photinus pyral 荧光素酶 | 1 mg protein |
| 10988537001 | 7-Deaza-2'-deoxy-GTP, Di-Li | 2 µmol (200 µl) |
| 11146165001 | Taq DNA Polymerase,5 units/Ál Taq DNA聚合酶 | 100 U |
| 3707598001 | b-Glucuronidase, 5ml β-葡萄糖醛酸酶 | 5 ml |
| 10244678001 | Formate Dehydrogenase, 80 u 甲酸脱氢酶 | 80 U |
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文献和实验产量及扩增长模板。 其他因素 除了酶，高浓度的dNTP或镁离子会降低忠实性。将dNTP的浓度从200μM降低到25-50μM可以增加精确度如果四种核苷的浓度不同，忠实性会受影响。进行较少的PCR循环也会有助于增加忠实性，因为增加循环数目和产物长度就会增加突变可能性。 1 简介 寡聚核苷酸引物的选择，通常是整个扩增反应成功的关键。所选的引物序列将决定PCR产物的大小、位置、以及扩增区域的Tm值这个和扩增物
和 PCR 都不能在最佳条件下进行并且 容易相互干扰，常只适宜用基因特异引物扩增较短的基因，及定量 PCR。两步法则是将 RT 和 PCR 分别进行，这样使得两个反应充分发挥各自的特点，更为灵活而且严谨，适合那些 GC 含量、二级结构严重的模板或者是未知模板，以及多个基因的 RT-PCR。 三、兼并引物 PCR（Degenerate Primer） 兼并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。兼并度越低，产物特异性越强。设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸，并避免引物
PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
重要。为了确保准确进行 DNA 拷贝，请确保选择高保真 DNA 聚合酶。高保真 PCR 酶具有 3'-5’ 核酸外切酶校对活性。当结合错误匹配的碱基对时，DNA 聚合酶停顿，导致合成暂延。合成暂延 允许去除错误匹配的核苷酸并使用正确的核苷酸取代。 保持序列准确的 DNA 聚合酶的绝佳选择是 Invitrogen SuperFi 或 Thermo Scientific Phusion 高保真DNA聚合酶。这两种酶具有高保真度，准确度是 Taq DNA 聚合酶的 300 倍或 52 倍，并且具有很高的产率。 Q
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