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5′/3′ RACE试剂盒,第2代

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  • ¥7401
  • roche
  • 3353621001
  • 2025年11月03日
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      5′/3′ RACE Kit, 2nd Generation

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      嵘崴达

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      −20°C

    • 规格

      10 REACTIONS

    5′/3′ RACE Kit, 2nd Generation

    5′/3′ RACE试剂盒,第2代

    sufficient for 10 reactions

    一般描述

    cDNA末端快速扩增(RACE)是一种用于从部分已知序列快速获得全长cDNA的常用技术。5′/3′ RACE试剂盒包含转录物逆转录酶和重组末端转移酶。转录子逆转录酶可转录全长cDNA,用于高达14 kb的55′或3′ cDNA片段的高灵敏度和快速扩增。其具有热稳定性(高达+ 65°C),适用于具有高二级结构的高GC含量模板。使用转录物逆转录酶可以实现高灵敏度,从而实现高效的cDNA合成和长RACE产物的获得。重组末端转移酶用于将同聚A尾添加至cDNA的3′末端。poly(A)+尾可降低oligo(dT)-锚定引物所产生的不适当截短的可能性,并且可以克服相较于G / C来说较弱的A / T杂交问题.此外,在oligo(dT)-锚定引物可以与内部位点进行杂交并且截短扩增产物之前,需要一段更长的A残基片段。使用基因特异性引物和oligo(dT)-锚定引物通过PCR扩增加尾cDNA。使用嵌套的特异性引物和PCR锚定引物,通过第二次PCR进一步扩增所获cDNA,从而将RACE产物克隆到合适的载体中以用于后续研究。

    特异性

    热灭活:终端转移酶:70°C,10分钟
    转录物逆转录酶:85°C,5分钟

    应用

    第二代5′/3′ RACE试剂盒适用于

    • RNA分子的结构和表达研究
    • 生成全长cDNA
    • 从低拷贝RNA信使中分离和鉴定5′或3′末端
    • 第一链cDNA合成
    • 扩增和进一步克隆稀有mRNA
    • 与外显子捕获方法结合使用
    • RACE反应产物无需克隆即可直接测序

    特点和优势

    • 强大的性能: 重组转录物逆转录酶能够在困难的二级RNA结构区域上向前移动。
    • 方便:RNA的5′ 或3′ 末端的功能和表达研究可以用相同的试剂盒进行。
    • 可靠: 使用重组末端转移酶获得的dA加尾cDNA降低了不当截短的概率。
    • 可重复:具有非3′ dT的寡聚dT-锚定引物能够确保与poly (A)尾的内端正确结合。
    • 产生长片段:使用转录物逆转录酶生成长达14kb的cDNA。


    对照反应包括使用对照引物neo1/rev将对照RNA转录成第一链cDNA。使用对照引物neo2/rev和neo3/for进行cDNA的扩增,以获得157bp的PCR产物。使用dATP对纯化的cDNA进行加尾。用寡聚dT-锚定引物和对照引物neo2/rev进行加尾cDNA的扩增,以获得293bp的PCR产物。

    包装

    1个试剂盒包含12个组分
     

    3353621001 5'/3' RACE Kit, 2nd generation 5 / 3’RACE试剂盒 1 kit (10 reactions)
    3531295001 Transcriptor Reverse Transcrip 逆转录转录因子 500 U (50 reactions)
    10567647001 Restr.-Endonucl. Hpa I, 500 u 500 U (3 - 10 U/µl)
    10606120001 Restr.-Endonucl. Sph I, 500 U 500 U (10 U/µl)
    10642690001 Restr.-Endonucl. Pvu II, 1000 1,000 U (10 U/µl)
    10656313001 Restr.-Endonucl. Hind III, 500 5,000 U (10 U/µl)
    10814270001 Primer,for cDNA Synthesis, p(d 40 µg (1 A260 unit, 8 nmol)

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      指在脱氧核糖(或核糖)的3位置的 C,接有 OH及磷酸等残基的末端,表示核酸的方向性。  

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