胶原酶A

胶原酶A

from Clostridium histolyticum

别名:
胶原酶

一般描述

胶原酶是一种蛋白酶，可切割三螺旋结构的蛋白，即胶原蛋白。溶组织梭菌 产生六种类型的胶原酶，即α、β、γ、δ、ε和λ。这些胶原酶对结缔组织具有活性，并且对明胶的反应性高于胶原。来自溶组织梭菌（ Clostridium histolyticum ）的胶原酶具有非常强的活性，它在低至4-10°C的温度下可从两端消化胶原蛋白。

特异性

胶原酶可降解天然胶原蛋白。梭菌蛋白酶，一种胰蛋白酶样酶，以及中性蛋白酶也会降解其他蛋白质。
酶活性：
胶原酶活性：>0.15U/mg（根据Wünsch）（+ 25℃，4-苯基-偶氮苄-氧羰基-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg作为底物）
污染酶活性：胰蛋白酶、梭菌蛋白酶和中性蛋白水解酶活性
胶原酶A具有平衡的酶活性比例。

应用

来自溶组织梭菌（ Clostridium histolyticum ）的胶原酶被广泛用于许多组织类型（例如，肺、心脏、肌肉、骨骼、脂肪组织、肝脏、肾脏、软骨、乳腺、胎盘、血管、脑、肿瘤和脐带等）的解离，并用于制备单细胞悬浮液以便建立原代细胞培养系统。当产量、活力和功能性很重要时，推荐使用胶原酶A。
Roche公司的梭菌 原酶已被用于制备来自多种组织的细胞，如肝细胞、脂肪细胞、胰岛细胞、上皮细胞、肌细胞、内皮细胞 等。但是，应根据经验确定各批次的酶是否适用于特定组织的解离。

单位定义

单位定义：来自Roche的胶原酶以Wünsch单位表示（在+25°C 下，每分钟使用Wünsch底物生成1 μmol产物）。
通常，胶原酶活性以Mandl单位表示（在+37°C下，在5小时内从胶原中释放1 μmol亮氨酸）。
遗憾的是，两种活性单位之间没有一致的换算因数，因为Mandl单位部分取决于胶原酶制剂中污染蛋白酶的浓度，而这是一个不确定变量。实际上，高纯度胶原酶制剂的Mandl单位比酶活要低于粗制胶原酶制剂。梭菌 制剂的换算因数通常约为1:1800（例如 ，指定批次的 梭菌 胶原酶含有约0.15 Wünsch U/mg和250 Mandl U/mg）。
内容物
冻干粉，非无菌

制备说明

激活剂：Ca²⁺
抑制剂：
胶原酶抑制剂：EDTA，EGTA，Cys，His，DTT，2-巯基yi醇
血清不抑制胶原酶。
梭菌蛋白酶抑制剂：TLCK
胰蛋白酶抑制剂：抑肽酶、胰蛋白酶抑制剂（蛋清、大豆）、血清
工作浓度：0.5至2.5 mg/ml
储存条件（工作溶液）：-15至-25 °C
罗氏建议仅重新配立即使用所需的冻干粉的量。重新配制的溶液可以在-15至-25 °C下储存长达一周。因为重新配制后活性降低了，所以要避免反复冻融。

重悬

可重悬于任意平衡盐溶液（如，HBSS）