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- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
2年
- 库存:
大量
- 供应商:
Solarbio
- 保存条件:
RT
- 规格:
40g
酵母缺陷型培养基SD-Ura-His-Lys
相关信息
| 有效期 | 2年 |
|---|---|
| 储存条件 | RT |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 40g |
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
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文献和实验1. 阳性克隆的筛选 (1)随机选取50个阳性克隆,扩增、抽提酵母质粒,电转化E.coliKC8宿主菌,抽提大肠杆菌中的质粒,酶切鉴定是否具有插入片段及排除相同的文库质粒。 (2)如果重复的插入序列较多,可另取50个阳性克隆来分析。最后得到数种片段大小不同的插入序列,再转化新的宿主细胞,检测是否仍为阳性克隆。2. 用质粒自然分选法(Natural Segregation)筛除只含有AD-文库杂合子的克隆 (1)将初步得到的阳性克隆接种SD/-Trp/-Ura液体培养基,培养
pLexA-53,pB42AD-T 阳性对照 pLexA-Pos(LexA/GAL4 AD融合蛋白〕 阳性对照 pLexA-Lam(LaminC蛋白少与其它蛋白相互作用) 假阳性检测质粒 5. 引物: pLexA测序引物及pB42AD测序引物。 三、酵母双杂交实验的基本流程 1. 将报告基因p8op-LacZ转化酵母EGY48菌株,用培养基SD/-Ura筛选。 2. 同时构建或扩增DNA文库,并纯化足够的质粒以转化酵母
1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办? 在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1 ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30 ℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起。用5 ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。 2.如果诱饵蛋白能直接激活报告
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