mirVana miRNA Bioarrays v9.2

micro RNA(miRNA)

，目标靶mRNA降解导致表达水平的下降，而第二个实验中荧光素酶转录本仅仅下降1.2倍，这种目的基因表达水平下看起来象源于miRNA介导的翻译抑制降，而不是siRNA介导的影响mRNA的稳定性导致。实验表明：siRNA可能以miRNA的方式作用于mRNA。实验人员还进行了另一个实验：改变第二个实验中的不匹配环的碱基序列看起来不影响抑制效果，但是siRNA和报告基因上的结合位点的匹配程度越高抑制效果越好，增加siRNA的量，抑制效果越好――这一点和抑制的情况一样――唯一不同的是：完全匹配的结合

miRNA专家谈之一：如何高效地提取和克隆miRNA

?如何上调或下调特定的miRNA?如何验证结果?全靠自己摸索，体会是很深，但时间也花不少。生物通收集了来自顶尖研究院的专家的实际操作经验，这将让你少走弯路。 Q1：你如何从细胞中高效分离并纯化miRNA ? Galina Gabriely(哈佛大学) 对于miRNA的分离，我们一般采用TRIzol试剂，它通常用于总RNA的分离。这种方法足以从培养的细胞系中纯化miRNA。不过，如果是从少量或质量差的组织样品中分离miRNA，我们则使用Ambion的mirVana

【原创】miRNA Northern Blot实验步骤

可以采取现在比较常用的TRIzol一步法。不要使用带柱子的RNA提取试剂盒，因为除了专门用于提取miRNA的试剂以外，绝大部分柱子无法捕获20nt左右的miRNA。 2、电泳 （1）配制15%的尿素变性PAGE胶，可以先用预冷的0.5XTBE缓冲液作为电泳缓冲液，60V预跑30min。 （2）将样品与RNA loading buffer按比例混合，70℃预热5min，立即放置冰上。 （3）上样前，用缓冲液冲洗点样孔，防止点样孔中的杂质影响电泳。 （4）点样时，使样品均匀铺在点样孔底部