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动植物组织葡萄糖含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样

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  • 北京
  • BC2500
  • 2026年02月26日
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      动植物组织葡萄糖含量测试盒

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    • 供应商

      Solarbio

    • CAS号

      BC2500

    • 规格

      50管/48样

    葡萄糖含量检测试剂盒说明书
    可见分光光度法
    注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
    货号:BC2500
    规格:50T/48S
    产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
    试剂名称 规格 保存条件
    试剂一 液体10mL×1 2-8℃保存
    试剂二 液体25 mL×1 2-8℃保存
    试剂三 液体25 mL×1 2-8℃保存
    溶液的配制:
    1、试剂一:1μmol/mL葡萄糖溶液;
    2、混合试剂的配制:使用前将试剂二和试剂三1:1等体积混合,用多少配多少。
    产品说明:
    葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言,葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源,而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。
    葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,GOD)催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶(PeroxidasePOD)催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505 nm 有特征吸收峰。


    技术指标:
    最低检出限:0.01 μmol/mL
    线性范围:0.015-3 μmol/mL
    注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
    需自备的仪器和用品:
    可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
    操作步骤:
    一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
    1. 组织的处理:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为15~10 的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),研磨成匀浆,置沸水浴中煮沸10 min(盖紧,防止水分散失),冷却至室温后,8000g25离心10min,取上清液备用。

    2. 细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~10001 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 蒸馏水),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W,超声3 s,间隔10 s,重复30次),置沸水浴中煮沸10min(盖紧,防止水分散失),冷却至室温后,8000g25离心10min,取上清液备用。
    二、测定步骤
    1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。
    2. 样本测定(在1.5mL EP管中依次加入下列试剂):
    试剂(μL 空白管 标准管 测定管
    上清液 - - 100
    试剂一 - 100 -
    蒸馏水 100 - -
    混合试剂 900 900 900
    涡旋混匀,置于37℃水浴锅/恒温培养箱反应15min后,于505nm波长处读取吸光度A,分别记为A空白、A标准和A测定。计算ΔA测定=A测定-A空白,ΔA标准=A标准-A空白。(空白管和标准管只需测1-2次)。
    三、葡萄糖含量计算
    1. 按蛋白浓度计算
    葡萄糖含量(µmol/mg prot)= C ×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷Cpr×V样)=ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
    1. 按样本质量计算
    葡萄糖含量(µmol/g 质量)= C ×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷W÷V样总×V样)= ΔA测定÷ΔA标准 ÷W
    1. 按细菌或细胞数量计算
    葡萄糖含量(µmol/106 cell)= C ×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷5÷V样总×V样)= 0.2×ΔA测定÷ΔA标准
    C:葡萄糖溶液浓度,1µmol/mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLV样:加入的样本体积,100µL=0.1mLV样总:样本总体积,1mLW:样本质量,g5:细菌或细胞数量(以106计),5×106
    注意事项:
    (A测定-A空白)小于0.005,建议加大提取样本质量(或细胞数量)或者样本上清液的加入量;(A测定-A空白)大于1.5,将上清液用蒸馏水稀释即可。计算公式中注意乘以稀释倍数。
    实验实例:
          1. 取0.1g小鼠肝脏加入1mL蒸馏水进行前处理步骤,离心取上清;再用蒸馏水稀释2倍后按测定步骤测定,用玻璃比色皿得吸光值ΔA测定=A测定-A空白=0.758-0.006=0.752ΔA标准=A标准-A空白=0.600-0.006=0.594。按样本质量计算
    葡萄糖含量(μmol/g 质量)= ΔA测定÷ΔA标准÷W×2(稀释倍数)=0.752÷0.594÷0.1×2= 25.320 μmol/ g 质量
          1. 取0.1g绿萝叶片加入1mL蒸馏水进行前处理步骤,离心取上清后按测定步骤测定,用玻璃比色皿测得吸光值ΔA测定=A测定-A空白=0.539-0.006=0.533ΔA标准=A标准-A空白=0.600-0.006=0.594。按样本质量计算
    葡萄糖含量(μmol/g 质量)= ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.533÷0.594÷0.1=8.972 μmol/ g 质量
          1. 取5百万Jurkat细胞样本加入1mL蒸馏水进行前处理步骤,离心取上清后按测定步骤测定,用玻璃比色皿测得吸光值ΔA测定=A测定-A空白=0.018-0.006=0.012ΔA标准=A标准-A空白=0.600-0.006=0.594。按细胞数量计算



    葡萄糖含量(μmol/106 cell)  = 0.2×ΔA测定÷ΔA标准=0.2×0.012÷0.594=4.040×10-3 μmol/106 cell
    相关发表文献:
    [1] Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion. Cell Death and Disease. March 2019; (IF5.959)
    [2] Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019; 153:152-160. (IF2.87)
    参考文献:
    [1] Basagni U, Bonicolini F. Ready to use liquid reagent for determining the glucose content in blood: U.S. Patent 5,077,199[P]. 1991-12-31.
    [2] Kabasakalian P, Kalliney S, Westcott A. Enzymatic blood glucose determination by colorimetry of N, N-diethylaniline-4-aminoantipyrine[J]. Clinical chemistry, 1974, 20(5): 606-607.
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      液。在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时,可增加裂解液中螯合剂的含量,细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔。所有试剂用无菌水配制,耗材经高温灭菌。将DNA分装保存于缓冲液中,避免反复冻融。 (2)DNA降解,DNA提取常见问题。实验材料不佳或量少,破壁或裂解不充分,吸附或沉淀不完全,洗涤时DNA丢失。尽量选用新鲜(幼嫩)的材料,动植物要匀浆研磨充分;G+菌,酵母裂解前先用 生物 酶或机械方式破壁。高温裂解时,时间适当延长(对于动物细胞,细菌可增加PK的用量)。增加吸附的时间

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