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- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Nitrate Reductase(NR) Activity Assay Kit
- 库存：
99
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC0080-50T/48S
- 规格：
50管/48样
紫外分光光度法
货号：BC0080
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 诱导剂储备液 | 液体50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 提取液 | 液体80 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体30 mL×1瓶 | -20℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
- 诱导剂储备液：用蒸馏水10倍稀释后使用，即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水，充分混匀，现配现用。
- 试剂二：临用前加入5 mL提取液溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃可保存2周。
NR（EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。
NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NADH在340nm下有特征吸收峰，340nm下吸光值的变化即可表示酶活。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可）避光，浸泡2h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻30min，取出样本，滤纸吸干。（一般不需要诱导处理，预实验结果没有活性则需要进行诱导处理）
2、称取约0.1 g样本，加入1 mL提取液，冰浴研磨，4000g，4℃离心10 min，取上清置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中加入下列试剂）
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 空白管 |
| 样本 | 60 | - |
| 提取液 | 340 | 400 |
| 试剂一 | 540 | 540 |
| 试剂二 | 60 | 60 |
三、NR活性计算
（1）按样本质量计算：
酶活单位定义：每小时每g样本中消耗1μmol NADH的量为一个 NR活力单位。
NR活性（U/g 质量）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×106]÷(W÷V提取×V样) ÷T=5.359×ΔA÷W
（2）按样本蛋白浓度计算：
酶活单位定义：每小时每mg组织蛋白消耗1μmol NADH的量为一个 NR活力单位。
NR活性（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×106]÷(V样×Cpr) ÷T=5.359×ΔA÷Cpr
V反总：反应体系体积，0.001L；V样：吸取样本体积，0.06mL；V提取：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5h；ε：NADH的摩尔消光系数，6220L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；106：单位换算系数，1mol=106 μmol。
注意事项：
- 当测定的吸光值大于1.5或者ΔA大于0.6时，建议将上清液稀释后测定。
- ΔA测定过小（小于0.01），可延长酶促反应时间。
- 建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。
- 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，空白管的初始测定值（A1空白管）在0.9左右，变化不超过0.05。
- 取0.1g小叶黄杨加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释2倍，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A1测定管-A2测定管=1.372-1.104=0.268，ΔA空白管=A1空白管-A2空白管=0.865-0.827=0.038，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.268-0.038=0.23，按样本质量计算酶活得：
- 取0.1g玉兰加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释2倍，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管= A1测定管-A2测定管=1.452-1.066=0.386，ΔA空白管=A1空白管-A2空白管=0.865-0.827=0.038，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.386-0.038=0.348，按样本质量计算酶活得：
相关发表文献：
[1] Chao Wang, Wenjing Zhang, Zehui Li,et al. FIP1 Plays an Important Role in Nitrate Signaling and Regulates CIPK8 and CIPK23 Expression in Arabidopsis. Frontier in Immunology. May 2018;(IF4.716)
[2] Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang,et al. Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants. International Journal of Molecular Sciences. December 2018;(IF4.183)
[3] Li S, Tian Y, Wu K, et al. Modulating plant growth–metabolism coordination for sustainable agriculture[J]. Nature, 2018, 560(7720): 595-600.
[4] Li Z, Wang R, Gao Y, et al. The Arabidopsis CPSF30‐L gene plays an essential role in nitrate signaling and regulates the nitrate transceptor gene NRT 1.1[J]. New Phytologist, 2017, 216(4): 1205-1222.
[5] Wang C, Zhang W, Li Z, et al. FIP1 plays an important role in nitrate signaling and regulates CIPK8 and CIPK23 expression in Arabidopsis[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 593.
参考文献：
[1] Bories P N, Bories C. Nitrate determination in biological fluids by an enzymatic one-step assay with nitrate reductase[J]. Clinical Chemistry, 1995, 41(6): 904-907.
[2] Hageman R H, Hucklesby D P. [45] Nitrate reductase from higher plants[M]//Methods in enzymology. Academic Press, 1971, 23: 491-503.
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Bionic Regulators Break the Ecological Niche of Pathogenic Bacteria for Modulating Dysregulated Microbiome in Colitis
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AuthorJiali Yang, Guizhen Zhang, Mengyun Peng, Shaochong Tan, Shengchan Ge, Xinyuan Yang, Yan Liang, Zhiyang Wen, Li Xie, Tonghai Zhou, Sixuan Wu, Jingyi An, Yifei Wang, Wei Liu, Kaixiang Zhang, Zhenzhong Zhang, Junjie Liu, Jinjin Shi |
Publish_toADVANCED MATERIALS |
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IF32.0860 |
PMID35924734 |
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
【原理】硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐： 产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以Nμg·g﹣1·h﹣1为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。【仪器与用具】分光光度计；真空抽气
(7)式或(9)式可计算叶绿素总量。 叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外，还含有叶黄素和胡萝卜素，因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区，故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。 器材与试剂 722分光光度计，叶绿体色素提取所需器材。 方法与步骤 1. 提取叶绿素。 2. 测定光密度。 在1cm比色杯中，注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求，选用相应的波长(测总量选用652nm，测叶绿素a、b含量
