400目细胞筛

小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项

剪剪成小颗粒。 取 2.5 mL注射器活塞，用软头打圈方式研磨组织，研磨至筛网上无明显的组织块为止，取新鲜的 1640培养基或者 PBS 冲洗筛网 2~3 次。 将获得的细胞悬液用 200 目细胞筛网过滤。 收集细胞悬液，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬细胞，并调整细胞浓度至 1×107/mL。 注意事项： 肿瘤体积一般不超过 1000 mm3，肿瘤质量在 0.6~0.8 g 之间。（若肿瘤较大下述各反应体系加倍）。 酶消化法剪刀剪碎肿瘤的标准为，其可被1 mL 的枪头自由吸取

新手必学：人源与鼠源不同肠道区段的类器官培养操作详解！

管反复吹打组织块10-15次，在光学显微镜下观察是否获得富集的隐窝组分。 ⑧将含隐窝的上清液通过70μm细胞筛过滤至10cm培养皿中，去除绒毛组分和组织碎片。 ⑨将过滤后的上清液转移至15mL离心管中，4℃、300×g离心3分钟沉淀隐窝。 ⑩取1μL隐窝沉淀重悬于含50μL预冷PBS的1.5mLEP管中，用倒置显微镜计数隐窝数量。   2. 小鼠肠道类器官培养 ①将隐窝沉淀转移至冰上预冷的1.5mLEP管中。 ②加入适量预冷的基质胶（每30μL基质胶含400-500个隐窝），轻轻吹打混匀。 ③取20

类器官培养与应用——卵巢癌类器官

，促进解离。 4、向悬浮液中加入 50μl 脱氧核糖核酸酶（2mg / ml），并在 20°C-22°C 下孵育1min。 5、加入 8ml 预冷的 DMEM/F12（含 10%FBS）终止消化。 6、将悬浮液经过 70μm 细胞筛网过滤，收集解离的细胞。 7、将过滤的细胞悬液在 4℃ 条件下 220g 离心 5min。 8、用 1mlDMEM / F12（20°C-22°C）冲洗细胞一次，离心收集细胞沉淀后，加入500μl DMEM / F12（20°C-22°C）重悬细胞，并在细胞计数后，将细胞