400目细胞筛

小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项

剪剪成小颗粒。 取 2.5 mL注射器活塞，用软头打圈方式研磨组织，研磨至筛网上无明显的组织块为止，取新鲜的 1640培养基或者 PBS 冲洗筛网 2~3 次。 将获得的细胞悬液用 200 目细胞筛网过滤。 收集细胞悬液，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬细胞，并调整细胞浓度至 1×107/mL。 注意事项： 肿瘤体积一般不超过 1000 mm3，肿瘤质量在 0.6~0.8 g 之间。（若肿瘤较大下述各反应体系加倍）。 酶消化法剪刀剪碎肿瘤的标准为，其可被1 mL 的枪头自由吸取

类器官培养与应用——卵巢癌类器官

，促进解离。 4、向悬浮液中加入 50μl 脱氧核糖核酸酶（2mg / ml），并在 20°C-22°C 下孵育1min。 5、加入 8ml 预冷的 DMEM/F12（含 10%FBS）终止消化。 6、将悬浮液经过 70μm 细胞筛网过滤，收集解离的细胞。 7、将过滤的细胞悬液在 4℃ 条件下 220g 离心 5min。 8、用 1mlDMEM / F12（20°C-22°C）冲洗细胞一次，离心收集细胞沉淀后，加入500μl DMEM / F12（20°C-22°C）重悬细胞，并在细胞计数后，将细胞

类器官培养与应用——垂体瘤类器官

5 ml 组织解离液的离心管中，轻轻震荡混匀后，放置于 37℃ 培养箱中解离 5-10min，解离期间轻轻震荡或吹打混匀。然后将组织转移至含有 5ml 组织解离液II的离心管中，放置于 37℃ 培养箱中继续解离 5min。 5、解离后的组织用 D-PBS 清洗 2 次后，将悬浮液经过 70μm 细胞筛网过滤，收集解离的细胞。 6、将过滤的细胞悬液在 4℃ 条件下 400g 离心 5min，收集细胞沉淀。 7、若细胞沉淀有明显的红色，则将细胞重悬于 5ml 的红细胞裂解液中，冰上孵育 10min