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张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

polymerase (Agilent). Otherhigh-fi delity polymerases, such as Kapa HiFi (Kapa Biosystems)can also be used for PCR in this protocol. 7. 10× Taq PCR buffer. 8. Novex Hi-Density TBE sample buffer (Life Technologies). 9. 10,000× SYBR Gold nucleic acid

5 分钟学会 cas9 基因敲除——原来设计方案如此简单

继续寻找合适成对 sgRNA 序列。04 根据找到的合适的 sgRNA 订购 oligo图为 U6 真核表达载体设计，Forward oligo:5'-ACGG, Reverse oligo:5'-AAAC。05 关于 cas9 的几个注意事项1）CRISPR-cas9 最主要的要求：PAM 序列为 NGG。2）sgRNA，即 cas9  guide  RNA，是引导 cas9 蛋白在基因编辑位点进行定向切割，所以一般是 20 个碱基，不含 PAM 序列。3）设计的 sgRNA 一定有效吗？一般设计

科学家们在 CRISPR/Cas 的重要研究成果

不同的 RNA 引导序列，由于长度较短，不允许剪子剪切。在其他类型的细菌中，Cas9 似乎对致病能力也很重要。原文检索：doi:10.1016 /j.molcel.2019.05.029Nat Med：重大进展！等位基因特异性基因编辑有望治疗遗传性耳聋在一项新的研究中，来自美国哈佛医学院和波士顿儿童医院的研究人员利用一种新的基因编辑方法挽救了患有遗传性听力丧失的小鼠的听力，而且在成功地做到这一点的同时没有产生任何明显的脱靶效应。这些被称为贝多芬小鼠（Beethoven mice）的动物因为具有相同