puro neo hygro抗性的小鼠胚胎成纤维细胞

常用载体元件介绍及病毒载体应用

) ，Neo(G418)，Zeo，Hygro，其中Puro和BSR是较常用的真核抗性。真核抗性常用于稳定株筛选等过程，具体使用抗性筛选的浓度可通过空细胞抗性预实验确认，浓度梯度可根据抗生素说明书推荐浓度范围设置。(4)蛋白标签：蛋白标签（protein tag）：与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。常见标签：3xFLAG，6xHis，HA，Myc ，OLLAS，GST等。需注意目的蛋白是否有功能肽如信号肽，前肽等，蛋白标签需要融合无功能肽的一端

基因剔除

当基因转入破坏生物体基因组内某个基因后，观察由此引起的表型变化，同样也可认识基因的功能，这是基因剔除(gene knock-out)。基因剔除是用DNA重组技术剔除或破坏生物体基因组内某一特定基因，而后观察由此引起的表型改变。这样，可以了解该基因的生物学功能。现以小鼠为例，先将待剔除的基因制成缺失突变型，在缺失的位置上插入一个选择基因如新霉素抗性基因(neo)，同时再接上另一个选择基因如胸苷激酶基因(tk)。将这一段带有已失去原有功能的待剔除基因的DNA片段装在载体上，转入在体

细胞转染后抗生素选择

表达都要根据载体的说明选择相应抗生素，不是可以随便用的。做细胞表达时，如果只是要求短时表达（即所谓瞬时转染），可不必用细胞抗生素。丁香园网友mikke_2000认为：应该是质粒转染细胞，筛选出稳定表达新基因的细胞系吧。筛选所选用的抗生素是跟你转染所用的质粒上所带的真核筛选抗性基因有关的。最常见的载体上带有新霉素抗性基因neo，所以筛选的时候用G418，如果带有嘌呤霉素的抗性基因就要选用puro。另外如果双转染，要考虑到两种质粒的筛选抗性的兼容。G418等的筛选浓度最好也用预试验摸一下~~