puro neo hygro抗性的小鼠胚胎成纤维细胞

常用载体元件介绍及病毒载体应用

) ，Neo(G418)，Zeo，Hygro，其中Puro和BSR是较常用的真核抗性。真核抗性常用于稳定株筛选等过程，具体使用抗性筛选的浓度可通过空细胞抗性预实验确认，浓度梯度可根据抗生素说明书推荐浓度范围设置。(4)蛋白标签：蛋白标签（protein tag）：与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。常见标签：3xFLAG，6xHis，HA，Myc ，OLLAS，GST等。需注意目的蛋白是否有功能肽如信号肽，前肽等，蛋白标签需要融合无功能肽的一端

基因剔除

当基因转入破坏生物体基因组内某个基因后，观察由此引起的表型变化，同样也可认识基因的功能，这是基因剔除(gene knock-out)。基因剔除是用DNA重组技术剔除或破坏生物体基因组内某一特定基因，而后观察由此引起的表型改变。这样，可以了解该基因的生物学功能。现以小鼠为例，先将待剔除的基因制成缺失突变型，在缺失的位置上插入一个选择基因如新霉素抗性基因(neo)，同时再接上另一个选择基因如胸苷激酶基因(tk)。将这一段带有已失去原有功能的待剔除基因的DNA片段装在载体上，转入在体

稳定细胞株药筛一般用什么抗生素？

维持 → 确定工作浓度 快速版： 载体带 Puro 抗性 → puromycin，多数细胞 1~10 μg/ml 载体带 Neo 抗性 → G418，浓度范围更大，筛选周期更长 载体带 Bsd 抗性 → blasticidin，起效快、用量低 双载体系统（如 Cas9 + sgRNA）→ 两种抗生素同时维持，各取筛选浓度的 1/2~1/4 或更低 --- 一、三种常用抗生素对比   Puromycin（嘌呤霉素） Neomycin/G418 Blasticidin（杀