手机验证
询价列表
暂时没有已询价产品
微信扫一扫分享
分享到新浪微博
分享到丁香园论坛
PI 3-激酶分析试剂盒
企业认证
点击 QQ 联系
仅用于体外实验
质量保证12个月
在-20℃下储存
避免反复冷冻/复溶
试剂盒组成
2×反应缓冲液(2×1.5ml)
1mM ATP(400ul)
脂类底物(8管)
对照PI 3-激酶(5ug)
您需要提供以下试剂和耗材
(γ32P)-ATP
1M HCL
2M乙酸/异丙醇 1:2
硅胶TLC平板
闪烁计数器
描述
PI 3-激酶分析试剂盒为高灵敏和定量检测PI 3-激酶活性或筛选PI 3-激酶抑制剂提供了高效且操作简单的工具。
PI3-激酶活性由放射性标记(γ32P)-ATP的量来进行评估;底物随后使用薄层色谱分离出来,且它的放射性在闪烁计数器中进行检测
背景
磷脂酰肌醇三激酶(PI3Ks)是一家族的酶,在细胞调节机制中发挥着关键作用。PI3Ks可以磷酸化磷酸肌醇(PIs)的3’-OH位置产生油脂二级信号。此功能可与许多生化反应联系,比如细胞生长,细胞分离,细胞生存,细胞增殖和迁移。基于结构相似性和底物专一性,PI3K家族可以分为I,II和III三个级别。
所有的人Class I由催化亚族(分子量大约:110kDa)和非催化亚族(分子量50,55,85,87或101KDa)组成。他们是磷酸肌醇(PI),磷酯酰肌醇-4-单-磷酸(PIP)和磷脂酰肌醇-4,5-双磷酸(PIP2)。
制备(γ32P)-ATP混合液
制备ATP和(γ32P)-ATP混合液,浓度为240uM.
每次分析需要10ul的(γ32P)-ATP混合液
制备脂质底物
每一脂质底物瓶中包含一定量的PI,可以分析12次,在瓶中装满脂质底物和125ul的水,充分摇匀。
在超声水浴锅中超声1h
激酶分析
按照下面的配方制备激酶分析混合液
反应缓冲液:25ul
脂质底物:10ul
酌情稀释的PI 3激酶样品:5ul
室温下孵育5分钟
加入10ul的(γ32P)-ATP混合液启动反应
37℃环境下培养15分钟
加入100ul HCL(1M)终止反应并摇匀
萃取油脂
漩涡混合混合液,离心1分钟,分离两相
去除上层水相
用400ul HCL(1M)清洗有机相,去除水相
定量
将100ul的有机相转移到硅胶TLC平板中,在2M的乙酸/异丙醇(1:2)中运行
暴露平板,进行观察;PI 3-激酶放在闪烁计数器中进行定量
100ul的清洗过的有机相可以通过液体闪烁器进行计数
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
马上登录 或注册,即可保存询价历史