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用于定量检测PEG和PEG修饰
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背景:生物制剂PEG化后可通过减缓蛋白水解和从循环系统中清除的速率来延长半衰期。PEG化蛋白的药效学可通过蛋白自身的特异性分析来进行评估,但这些方法需要消耗大量时间,且建立目标蛋白的ELISA非常昂贵。西宝生物供应PEG ELISA试剂盒,可以检测PEG化蛋白的PEG段,因此可用于PEG化蛋白药效学的评估。
产品介绍:
分析试剂盒是直接竞争ELISA。共价结合甲氧基-PEG的BSA(牛血清白蛋白)包被在96孔微孔板上。稀释的样品和包含PEG化蛋白的标准品(50ul)加到微孔板中,结合抗-PEG的辣根过氧化物酶(HRP 抗-PEG,50ul)加到微孔板中,微孔板在微孔板振荡器上孵育1小时。冲洗微孔板,TMB,HRP底物(100ul)加入到孔中孵育20分钟,会产生蓝色。加入1N HCL(100ul)终止反应,颜色将由蓝色变为黄色,检测其在450nm处的吸光值。如果样品中含PEG,它就会与包被在板上的PEG竞争结合HRP 抗-PEG,吸光度值会减小。
ELISA试剂盒中使用的抗体是小鼠单克隆抗体,对聚乙二醇主链具有专一性。研究表明此试剂盒可用于检测包含1个或多个PEG链的蛋白和未结合的PEG。灵敏度会随着PEG链的长度增加和PEG化的程度而增大,因此我们可以产生一个标准曲线。试剂盒提供标准品是带20kDa mPEG链的BSA,用户可以用标准品去确认试剂盒的性能。
试剂盒中包含内容: PEG包被的96孔微孔板(12个可拆开的条,每条有8个孔),在-20℃下储存HRP抗-PEG复合物,20ul(1瓶),在-20℃下储存HRP PEG稀释液,50mlPEG-BSA标准品,20ul(1瓶),在-20℃下储存HRP PEG清洗缓冲液(20×),50mlTMB试剂,11ml终止液,11ml
需要准备的耗材如下: 精确的移液器和枪头蒸馏水或去离子水聚丙烯或玻璃管混合仪吸水纸或纸巾微孔培养仪/混合器(混合速度~150转/分钟)平板垫圈450nm处光密度范围在0-4的平板阅读器绘图软件
试剂盒标准液的制备
分析过程
结果计算
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