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检测修饰性PEG和PEG修饰蛋
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Seebio
ELISA
评估mPEG化生物制剂和mPEGs的药效学
HRP
1 Kit
应用: 此试剂盒只用于科研,不可用于诊断或治疗
产品介绍: 治疗蛋白通过结合mPEG链以PEG化,蛋白PEG化后可通过减缓蛋白水解和从循环系统中清除的速率来延长半衰期,因此可以增加其疗效(refs.1&2)。mPEG化蛋白的药效学通常情况下应用对多肽链的特异性分析进行评估。但这些方法需要消耗大量时间,且建立目标蛋白的ELISA非常昂贵。mPEG ELISA试剂盒可以检测mPEG链,因此适合评估mPEG化生物制剂和mPEGs的药效学。
分析试剂盒基于夹心ELISA原理,它应用了两个抗-PEG小鼠单克隆抗体。针对PEG的聚乙二醇主链的特异性抗体包被在96孔板上,用于捕获。另一专一性抗体用于特异性结合结合了辣根过氧化物酶的mPEG的末端甲氧基,进行检测。
此ELISA试剂盒可用于检测游离mPEG(图1)和带有一个或多个mPEG链的mPEG化蛋白(图2)。然而,它不能检测缺少末端甲氧基的PEG链。试剂盒的灵敏度随着mPEG链的长度而变化,因此mPEG或mPEG化的分子应该产生一个标准曲线。研究表明此试剂盒可识别分子量大于等于2kDa的mPEG。试剂盒提供5kDa mPEG-氨的标准品,可方便用户去检测试剂盒的性能。
分析方法: 首先将100ul的HRP抗-mPEG加入到微孔板中,然后加入100ul的稀释样品和标准品,在微孔板振荡器上混匀1小时。冲洗微孔以后,加入100ul的TMB到微孔中,孵育20分钟,结果会产生蓝色。加入1N HCL 100ul终止反应,蓝色会变为黄色,检测其在450nm处的吸光值。mPEG的浓度从标准曲线上获得。
试剂盒包含以下内容: 抗-PEG包被的96孔板(12个可拆开的条,每条8孔),在-20℃下储存HRP 抗-mPEG复合物,25ul(1瓶)。在-20℃下储存mPEG稀释液,50ml5kDa mPEG-氨标准品,100ul(1瓶)。在-20℃下储存 mPEG清洗缓冲液,60mlTMB试剂,11ml终止液,11ml
需提供以下试剂或耗材: 移液器和枪头蒸馏水或去离子水聚丙烯或玻璃管漩涡混合器微孔板振荡仪(混合速度,150转/分钟)平板垫圈在450nm处光密度在0-4的平板阅读器绘图软件
标准液的制备:
分析过程:
结果计算:
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