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质粒小量提取试剂盒
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Solarbio
D1100
50T/100T
质粒小量提取试剂盒介绍:
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白质及细胞中其他有机化合物。从1-5ml大肠杆菌LB培养液中,可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA,提取率达85-90%。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规的分子生物学试验,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂,操作安全。
产品包装:
注意事项:1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA 全部加入),混匀,置于2-8℃保存。2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在漂洗液中加入无水乙 醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的无水乙醇)。3、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊,如有混浊现 象,可在37℃水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后应立即盖紧盖子,如非指明,所 有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心。5、如果是提取革兰氏阳性菌质粒,必须在裂解细胞前破细胞 壁,方法如下:收集适量菌体,加入250ul溶液Ⅰ,充分悬浮 菌体,加入溶菌酶至终浓度为10-20mg/ml,37℃处理30min 左右。加入溶菌酶的浓度和处理时间可根据不同的菌株和具体 试验条件进行调整。6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效 率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液 应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范 围),pH值低于7.0会降低洗脱效率。
质粒提取试剂盒简介: 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒提取原理及流程: 较常用的质粒DNA提取方法有3种:碱裂解法、煮沸法和去污剂(如Triton和SDS)裂解法。前两种方法比较剧烈,适用于较小的质粒(<15kb)。去污剂裂解法则比较温和,一般用于分离大质粒(>15kb)。碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法,其原理为:染色体DNA比质粒DNA分子大得多,且染色体DNA为线状分子,而质粒DNA为共价闭合环状分子;当用碱处理DNA溶液时,线状染色体DNA容易发生变性,共价闭环的质粒DNA在回到中性时即恢复其天然构象;变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀,而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中,离心去除沉淀后,就可从上清中回收质粒DNA。目前,市面上质粒提取试剂盒大多数都是采取上述的碱裂解方法,不同之处在于纯化方式。目前比较常用的纯化系统是硅基质吸附材料,其原理为在高盐环境下质粒DNA能够结合到硅基质上,然后用低盐缓冲液或水将质粒DNA从硅基质上洗脱下来。得到的质粒可以用于酶切、PCR、测序、细菌转化、转染等分子生物学实验。影响质粒提取的因素: 质粒提取的得率和质量与很多因素有关,如宿主菌的种类和培养条件、细胞的裂解、质粒拷贝数、质粒的稳定性、抗生素、吸附柱的吸附量等相关文献:《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu,Xuewu Guo,Jun Lu,Xi Sun,Feng Li,Yefu Chen,Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影响因子:2.275 PMID:23256925《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影响因子:2.533 PMID:24951963《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong,Guanglu Wang,Cuiying Zhang,Haigang Tan,Xi Sun,Mingyue Wu,Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影响因子:2.275 PMID:23597844
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