含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒兼具了传统 RNAi 载体的优势(稳定表达和使用病毒递送的能力)与组织特异性表达和同一转录本中多次靶标基因敲低能力。包括在含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒中的 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体设计用于表达人工 miRNA,其经基因工程改造后与靶序列具有 100% 同源性,将导致靶标切割。该载体包括来自内源性 miRNA 的侧翼和环序列,其指导从较长的 Pol II 转录本(miRNA 前体)中切除基因工程改造 miRNA。使用 Invitrogen 优质 BLOCK-iT™ RNAi Designer,70% 以上的构建体产生超过 70% 的敲低。
基因工程改造 miRNA 的 Pol II 表达可实现:
o CMV 立即早期启动子的强表达,可选择通过 MultiSite Gateway™ 重组使用组织特异性或其他调节启动子 o pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体中祖mu绿 GFP (EmGFP) 报告基因的同-顺反子表达,使 EmGFP 的表达与目的 miRNA 敲低活性之间具有极强的相关性 o 与许多用于基因表达的 Invitrogen Gateway™ 目的 (DEST) 载体兼容;包括用于稳定转导分裂、非分裂和原代细胞类型的慢病毒载体、用于单位点染色体整合的 Flp- In™ 系统以及替代报告基因融合构建体 o 在同一转录本上表达一个以上的基因工程改造 miRNA,允许同时敲低多个基因并产生合成表型