质粒小量提取试剂盒

质粒小量提取试剂盒介绍:

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白质及细胞中其他有机化合物。从1-5ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA，提取率达85-90％。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规的分子生物学试验，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。

产品包装：

试剂盒组成	D1100-50	D1100-100	储存条件
RNase A	300ul	500ul	-20℃
溶液Ⅰ	15ml	30ml	RT
溶液Ⅱ	15ml	30ml	RT
溶液Ⅲ	20ml	40ml	RT
漂洗液	15ml	15ml×2	RT
洗脱液	15ml	30ml	RT
吸附柱	50个	100个	RT
收集管	50个	100个	RT
说明书	1份	1份	RT

注意事项：
1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA
全部加入)，混匀，置于2-8℃保存。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在漂洗液中加入无水乙
醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的无水乙醇)。
3、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现
象，可在37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。
4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后应立即盖紧盖子，如非指明，所
有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心。
5、如果是提取革兰氏阳性菌质粒，必须在裂解细胞前破细胞
壁，方法如下：收集适量菌体，加入250ul溶液Ⅰ，充分悬浮
菌体，加入溶菌酶至终浓度为10-20mg/ml，37℃处理30min
左右。加入溶菌酶的浓度和处理时间可根据不同的菌株和具体
试验条件进行调整。
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效
率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液
应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范
围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。

质粒提取试剂盒简介：
质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1-200kb不
等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞
中。质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制
和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的
遗传信息。
质粒提取原理及流程：
较常用的质粒DNA提取方法有3种：碱裂解法、煮沸法和去污剂
(如Triton和SDS)裂解法。前两种方法比较剧烈，适用于较小的质粒
(<15kb)。去污剂裂解法则比较温和，一般用于分离大质粒(>15kb)。
碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其原理
为：染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分
子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；当用碱处理DNA溶液时，
线状染色体DNA容易发生变性，共价闭环的质粒DNA在回到中性
时即恢复其天然构象；变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞
碎片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态
存在液相中，离心去除沉淀后，就可从上清中回收质粒DNA。
目前，市面上质粒提取试剂盒大多数都是采取上述的碱裂解方法，
不同之处在于纯化方式。目前比较常用的纯化系统是硅基质吸附材
料，其原理为在高盐环境下质粒DNA能够结合到硅基质上，然后用
低盐缓冲液或水将质粒DNA从硅基质上洗脱下来。得到的质粒可以
用于酶切、PCR、测序、细菌转化、转染等分子生物学实验。
影响质粒提取的因素：
质粒提取的得率和质量与很多因素有关，如宿主菌的种类和培养
条件、细胞的裂解、质粒拷贝数、质粒的稳定性、抗生素、吸附
柱的吸附量等

相关文献：
《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu，Xuewu Guo，Jun Lu，Xi Sun，Feng Li，Yefu Chen，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影响因子:2.275 PMID:23256925
《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影响因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong，Guanglu Wang，Cuiying Zhang，Haigang Tan，Xi Sun，Mingyue Wu，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影响因子:2.275 PMID:23597844

D1110

质粒大量提取试剂盒

D1120	革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒	Solarbio
D1130	革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒	Solarbio
D1140	无内毒素质粒小量提取试剂盒	Solarbio
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