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yuanmu
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上海远慕生物科技有限公司
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250g
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文献和实验,每天换液一次。 8、用心肌分化培养基(II)进行换液,放置在 37℃,5%CO2 的培养箱中培养 7 天,每天换液一次。 9、用心肌分化培养基(III)进行换液,放置在 37℃,5%CO2 的培养箱中培养 2 天,每天换液一次。 10、分化后,吸出原培养基,加入含 2% I 型胶原蛋白酶和 20% FBS 的 PBS 溶液(含 Ca2+ 和 Mg2+),消化 60min 后,加入 0.25% Trypsin-EDTA 再消化 10min。 11、加入 MEM 完全培养基(10%FBS
3-4min。 6、将消化下来的细胞悬液收集并 90g 离心 5min,收集细胞沉淀并加入 iPSCs(II)培养基,同时进行细胞计数。 7、将 iPSCs 接种在 Matrigel 平板上,接种密度为 1.5×106 个/60mm 平皿,接种后添加 4ml iPSCs(II)培养基,放置在 37℃,5%CO2 的培养箱中过夜培养。 8、接种后第二天,用 DEs 培养基进行换液,放置在 37℃,5%CO2 的培养箱中培养 6 天,每 2 天换液一次。 肝内胚层分化 9、用 HEs 培养基进行换液,放置
,以及滋养细胞)来活化原代培养细胞。 贴壁细胞相比较悬浮细胞——在转染效率方面贴壁细胞和悬浮细胞之间的差异显著。相对于贴壁细胞(如 HEK,CHO),悬浮细胞(如 HL 60,Jurkat)非常难以转染,可能是因为细胞间膜结构的差异,但目前还没有分子水平上合理机制的解释。 分板方案——在对培养细胞进行分板传代培养之前,必须把贴壁细胞用胰蛋白酶消化使之脱离培养基质。这个常规操作可导致正常细胞功能受到严重损害。因此分批方案的不同(如,胰蛋白酶消化时间的长短,胰蛋白酶的灭活等)需要优化。 传代次数——传代
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