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小鼠/兔IgG-ECL显色试剂
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ECL Western Blotting Detection Kit(Mouse/Rabbit IgG)
大量
Solarbio
1盒
Western blotting ECL化学发光法检测试剂盒货号:SW2040 Western blotting(小鼠/兔IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒产品内容:1. 封闭试剂:30g(可配制400ml)。2. 10 倍浓缩抗体稀释液,50ml。3. HRP 标记二抗,0.3ml,效价1:500-1000。4. ECL 显色液,25mlA+25mlB。保存:-20℃避光密闭保存,一年有效。若经常使用,可将封闭试剂,抗体稀释液和ECL 显色液存放于2-8℃以方便使用。产品简介:SDS-PAGE电泳后,蛋白质按照分子量大小分离,转移到固相载体(例如**纤维素薄膜)后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的第二抗体起反应,加入发光底物后,能让胶片感光。经显影和定影后,可以在胶片上显示出条带(抗原所在位置)。操作步骤:(仅供参考)常规电泳转膜后:1) 清洗转印膜:将膜剥离下后,作好标记,一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS,防止影响后面的抗体结合。2) 按5g 封闭试剂加100ml 双蒸水计,配制膜封闭液,配好的膜封闭液为乳白色悬液,将漂洗过的转印膜放入封闭液内,置摇床孵育,室温封闭30min。用TBS-T 缓冲液(PH7.6)洗膜,室温漂洗3 次每次5min。3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml 10×抗体稀释液加入90ml 双蒸水,混匀,可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。4) 用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中,加入一抗工作液,封口,4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注:如果所加一抗不同,可在此步将膜沿电泳方向剪成条,分别作好标记,分开孵育。5) 用TBS-T 缓冲液(PH7.6)洗膜,室温漂洗3 次每次5min。6) 用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量,按10ml 抗体稀释液加入15ul HRP 标记二抗的比例,配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中,加入二抗工作液,封口, 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。7) 用TBS-T 缓冲液(PH7.6)洗膜,室温漂洗3 次每次10min。8) 根据用量,取ECL 发光液A、B 等量混匀,加在膜正面,暗室显色1-5 分种。倾去显色液,小心用纸吸去显色液,在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片,做好标记,轻轻的放在膜上,显色30 秒到1 分钟,取出胶片浸入显影液中,观察显**况,再放入定影液中1 分钟。根据条带强弱,再次感光时可减短或者加长感光时间(从5 秒到30 分钟)以期达到理想结果。注意事项:1. 请根据一抗来源选择试剂盒。2. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深,可延长膜封闭时间,加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱,可增加抗体浓度,可延长抗体孵育时间或加长感光时间。3. TBS-T(0.01M,PH7.6)配制方法:称取NaCl 8.5g ,Tris 1.21g ,用800ml 的双蒸水溶解,用盐酸调PH 到7.6,再加入0.5ml Tween-20,用双蒸水 加至1000ml,混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)相关产品:D1060 10×电泳转移缓冲液A1800 抗体稀释液(普通型)T1081 10*TBSTSW3010 膜封闭液SW3020 膜再生液PE0010 ECL Plus 荧光检测试剂(ECL 超敏发光液)XYF 显影粉DYF 定影粉AH 暗盒JPKD-5*7 胶片SolarbioBeijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 010-56371250Fax: 010-56371281/82Http://www.solarbio.cn
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