小鼠IgG-ECL显色试剂盒

小鼠IgG-ECL显色试剂盒

 Western blotting ECL化学发光法检测试剂盒
货号：SW2010 Western blotting (小鼠IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒
产品内容：
1. 封闭试剂：30g(可配制400ml)。
2. 10 倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3. HRP 标记二抗，0.3ml，效价1：500-1000。
4. ECL 显色液，25mlA+25mlB。
保存：
-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL 显色液存放于2-8℃以方
便使用。
产品简介：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如**纤维素薄膜）后，固相载体
以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记
的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在
位置）。
操作步骤：(仅供参考)
常规电泳转膜后:
1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以尽量
洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2) 按5g 封闭试剂加100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入
封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3 次每次5min。
3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml 双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。
此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4) 用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加
入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如
果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5) 用TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3 次每次5min。
6) 用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml 抗体稀释液加入15ul HRP 标记二抗的比例，配制二抗工
作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天
7) 用TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3 次每次10min。
8) 根据用量，取ECL 发光液A、B 等量混匀，加在膜正面，暗室显色1-5 分种。倾去显色液，小心用纸吸去显
色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30 秒到1 分钟，取出
胶片浸入显影液中，观察显**况，再放入定影液中1 分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光
时间（从5 秒到30 分钟）以期达到理想结果。
注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。
2. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果
条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3. TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml 的双蒸水溶解，用盐酸调PH 到
7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
相关产品：
D1060 10×电泳转移缓冲液
A1800 抗体稀释液（普通型）
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SW3010 膜封闭液
SW3020 膜再生液
PE0010 ECL Plus 荧光检测试剂(ECL 超敏发光液)
XYF 显影粉
DYF 定影粉
AH 暗盒
JPKD-5*7 胶片
Solarbio
Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd
Tel: 010-56371250
Fax: 010-56371281/82
Http://www.solarbio.cn

Western blotting实验相关试剂：
SDS-PAGE电泳：
蛋白胶配置：
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T8090 TEMED（PAGE胶促凝剂）
A1025 40%(37.5:1)制胶液
S1051 4×SDS-PAGE 分离胶缓冲液（PH=8.8）
S1052 4×SDS-PAGE 浓缩胶缓冲液（PH=6.8）
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蛋白预制胶
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PG01510-S Precast-Gel变性蛋白预制胶 浓度15%
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PG41510-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度4-15%
PG01010-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度10%
PG01210-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度12%
PG01510-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度15%

蛋白电泳：
PR1300 超低分子量蛋白Marker
PR1400 低分子量蛋白Marker
PR1500 次高分子量蛋白Marker
PR1600 预染低分子量蛋白Marker
PR1700 预染次高分子量蛋白Marker
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PR1920 彩虹245广谱蛋白Marker （11-245KD)
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P1016 4×蛋白上样缓冲液（含β-巯基乙醇）
P1017 4×非变性蛋白上样缓冲液
P1018 2×蛋白上样缓冲液（含DTT）
P1019 2×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂）（B8120 溴酚蓝 G8190 甘油 S8270 蔗糖）
M8210β-巯基还原剂
T1070 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（G8200 甘氨酸）
P1300-500 考马斯亮蓝快速染色液（C8420 考马斯亮蓝G-250、C8430 考马斯亮蓝R-250）
P1305 考马斯亮蓝染色套装（染色液+脱色液）
R8070 剥离硅烷
B8150 亲和硅烷

转膜：
印记膜：尼龙膜、PVDF 膜、硝酸纤维素膜（NC 膜）
YA1711 硝酸纤维素膜NC膜（0.45um）
YA1701 PVDF膜（0.45um）13.25*15cm
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P0012 10×丽春红（P8330 丽春红S）
D1060 10×电泳转移缓冲液

封闭、抗体孵育：
T1080-500 20*TBS
T1081-500 10*TBST
T1085-500 1*TBST（T8220 吐温 -20）
SW3010 膜封闭液
SW3015 5%BSA 封闭液（A8010、A8020、126575 牛血清白蛋白BSA）
D8340 脱脂奶粉
C8200 酪蛋白
SW3020 膜再生液

抗体：一抗、二抗
SE 系列 HRP 标记二抗、SF 系列FITC 标记二抗
SH1 酶标记亲和素HRP 、SHB2 生物素化羊抗人IgG
A1800 抗体稀释液（普通型）
A1810 一抗稀释液
A1820 HRP 标记抗体稀释液
A1830 AP 标记抗体稀释液
A1840 荧光抗体稀释液

Western信号检测：
PR1100 BCIP/NBT 地物显色试剂盒（B8090 BCIP、N8140 NBT）
A2010 AEC 显色试剂盒（20×）（A5754 AEC）
DA1010 DAB 显色试剂盒（20×）（D8230 DAB-4HCL）
PE0010 ECL Plus超敏发光液
PE0020 West Pico ECL超敏发光液
PE0030 West Femto ECL超敏发光液
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SW1020 Western blotting（兔IgG）DAB 法显色试剂盒
SW1030 Western blotting（山羊IgG）DAB 法显色试剂盒
SW1040 Western blotting（小鼠/兔IgG）DAB 法显色试剂盒
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YA0380 定影粉
YA0381 柯达定影液
YA0371 柯达显影液
YA0860 暗盒 5*7
YA0870 高速增感屏 5*7
YA0360 胶片 5*7