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辣根过氧化物酶链酶亲和素结合物可以用于生物素标记的抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测。具体用途包括Western blot、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、斑点杂交、化学发光检测等。
HRP StreptavidinConjugate用高纯度的链酶亲和素和超纯的辣根过氧化物酶交联而成,确保产生最低的本底和最高的灵敏度。
链酶亲和素的分子量为60kD,可以高度特异性地和生物素结合。链酶亲和素是一个4聚体蛋白,可以同时结合4个生物素分子。链霉亲和素,从Streptomyces adidinii中纯化获得,和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是,Streptavidin是一种非糖基化蛋白,并且基本不带电荷。Avidin的pI=~10.5,在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性条件下不带电荷,因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多,这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。
辣根过氧化物酶即horseradish peroxidase(HRP),可以在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化ECL类试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光,可以在ELISA时催化TMB产生蓝色,也可以在免疫组化、免疫细胞化学或Western blot检测时催化DAB产生棕色沉淀。
1mg/ml的辣根过氧化物酶标记链酶亲和素用于各种常规用途的推荐稀释比例参考下表,实际实验操作过程中需根据具体情况适当调节辣根过氧化物酶标记链酶亲和素的稀释比例。
| Dot blot |
免疫组织化学 |
ELISA |
Western blot |
Western blot |
| 1:2000-10000 |
1:100-500 |
1:5000-200000 |
1:2000-20000 |
1:1000-4000 |
相关产品:
| 产品编号 |
英文名称 |
中文名称 |
规格 |
| ECT2229A |
HRP Streptavidin Conjugate |
辣根过氧化物酶链酶亲和素结合物 |
1ml |
| ECT2230A |
HRP Streptavidin Conjugate |
辣根过氧化物酶链酶亲和素结合物 |
1ml |
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文献和实验与生物素高度特异性结合的关系来放大免疫组化信号,但此方法有产生内源性生物素背景的可能性。而酶标聚合物法,利用聚合物与二抗结合,形成聚合物-二抗复合物,实现信号放大,该方法不受内源性生物素的干扰。 表 2 免疫组化多种检测系统分类 图 2 酶标聚合物法检测系统 图 3 链霉亲和素-生物素法检测系统 在显色法中,针对 HRP(辣根过氧化物酶)显色系统,其常用底物为DAB/AEC(HRP/DAB 呈棕褐色染色,具有很好的光稳定性,HRP/AEC 呈红色染色,在阳光下会褪色,不易保存。 基础 IHC
-NHS在磷酸盐缓冲液中结合2 h。反应后,在含50 mM PO4、50 mM NaCl和10%甘氨酸的磷酸缓冲液中使吡咯-链酶亲和素结合物脱盐。 小鼠IgG与吡咯-NHS的结合与上述方法相同,并用作阴性对照。 点样溶液(含10%甘油的磷酸盐缓冲液)包含20 mM的自由吡咯和浓度为12 mM、8 mM和4 mM的链酶亲和素或小鼠IgG抗体。这些生物分子通过电化学过程固定在生物芯片表面。电聚合过程中,工作电极(棱镜金表面)和对电极(点样针)间生成电脉冲(2 V,100
SABC 法与其他免疫组织化学染色方法比较 SP法或SAP法 该法由于用链霉亲和素替代ABC法中的亲和素―生物素复合物,因此背景清晰,敏感性增加,无非特异性染色,阳性反应易于辨认。是目前最常用的方法。在操作步骤中,与SABC法相比,仅有一个步骤不同,即试剂盒中的链霉菌抗生物素―过氧化物酶替代了亲和素―生物 素―过氧化物酶。因此无需使用生物素阻断剂消除内源性生物素。SP法与SAP法的区别在于前者的放大系统为链霉亲和素―过氧化物酶,后者是链霉亲和素―碱性磷酸酶,故导致
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