Karpas-299（人间变性大细胞淋巴瘤细胞）

Karpas-299（人间变性大细胞淋巴瘤细胞）

一、细胞收到后操作流程

1.收到细胞拿回实验室后，先打开外包装，用 75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，放到显微镜下观察细胞状态。因运输问题，细胞会有不同程度影响，先不要打开培养瓶盖，放到培养箱静置 4 小时左右，以便稳定细胞状态。

2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态(所拍照片作为后期售后依据)。建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

3.贴壁细胞：若细胞生长密度超过 80%时，根据情况传代，若细胞未超过 80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，原瓶（T25 瓶）保留 6-8ml 完全培养液继续培养，直至细胞密度超过 80%以后再进行传代。

4.悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体转移至离心管，1000RPM 离心 5 分钟，弃去上清液，管底细胞沉淀加入 10ml 完全培养基吹打、重悬。放入新的细胞培养瓶/皿中培养过夜，根据细胞密度及生长情况分瓶传代。

二、细胞常规培养步骤（请严格遵守无菌操作）

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中，加入约 6ml 培养基，培养过夜），第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养瓶中上清液，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻轻敲几下培养瓶后加 6ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。

3. 吹打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 到 1：4 的比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中。

2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1：2到 1：3 的比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM 条件下离心 5 分钟，去除上清，

按冻存数量加入血清及 DMSO，冻存比例为 90%FBS+10%DMSO。

注意事项：

1. 收到细胞后请尽快更换为含10% FBS的新鲜培养基，不建议使用原瓶中运输用培养基。

2. 如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系实验室。

3. 细胞任何售后问题，均需拍照存档并及时联系客服。

细胞用途：仅供科研使用，不能用于临床诊断使用，细胞培养需要耐心与细心，希望您能获得一个满意的结果。