兔（Rabbit）谷胱甘肽还原酶(GR)ELISA检测试剂盒

兔（Rabbit）谷胱甘肽还原酶(GR)ELISA检测试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

 

产品货号：DM-R12232

产品规格：48/96T

ELISA 试剂盒，全称酶联免疫吸附试验试剂盒（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Kit），是基于抗原 - 抗体的特异性免疫结合特性，搭配酶促信号放大体系，实现对生物样本中目标物质精准定性、绝对定量的商品化成套实验试剂。它是生命科学、生物医药领域最主流的蛋白类物质定量工具，也是你此前检测细胞培养上清中目标因子、验证样本冻存合规性的核心实验载体。

 

 

你检测细胞培养上清中蛋白类目标物，使用的几乎都是双抗体夹心 ELISA 试剂盒，这也是目前最主流的试剂盒类型，核心工作原理如下：

捕获阶段：将标准品、待测样本加入预包被了捕获抗体的酶标板孔中孵育，样本中的目标物会被捕获抗体特异性抓取，固定在孔底； 

洗涤去除杂质：洗去未结合的游离蛋白、培养基杂质等非特异性物质，仅保留结合在孔底的目标物； 

检测与信号放大：加入酶标检测抗体，与目标物的另一表位结合，形成 “捕获抗体 - 目标物 - 酶标检测抗体” 的夹心复合物，再次洗涤去除未结合的多余抗体； 

显色与读数：加入底物液，复合物上偶联的酶会催化底物显色，加入终止液终止反应后，用酶标仪读取 OD 值；最终通过标准品的浓度和对应 OD 值拟合标准曲线，即可换算出待测样本中目标物的精准浓度。 

根据检测目标物和反应模式，ELISA 试剂盒主要分为两类，你日常使用的以第一类为主：

双抗体夹心 ELISA 试剂盒：适用于检测细胞因子、抗体、重组蛋白等大分子物质，也是细胞培养上清样本检测的金标准方案，特异性强、灵敏度高、可精准定量；

 

 

竞争法 ELISA 试剂盒：适用于检测激素、小分子多肽等分子量过小、无法同时结合两个抗体的物质，通过竞争结合的模式实现定量。 

 

 

ELISA 试剂盒之所以成为你这类细胞实验样本检测的shou选工具，核心优势在于：灵敏度极高，通过酶促信号放大可检测到 pg/mL 级别的微量目标物，完全适配细胞培养上清中低丰度细胞因子的检测；特异性极强，基于抗原 - 抗体的特异性结合，可精准识别目标物，几乎不受样本中其他蛋白的干扰；操作简便、通量高，预制体系无需自行优化，可同时检测数十个样本，适配批量细胞孔样本的检测需求；可实现绝对定量，通过标准品可精准换算出样本中目标物的具体浓度，而非仅定性判断阴阳，完全匹配你验证样本浓度是否符合冻存要求、合并后样本均一性的实验需求。

 

ELISA（酶联免疫吸附测定，Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）的核心原理是：抗原与抗体的特异性免疫反应 + 酶催化底物的化学显色反应，通过颜色深浅定量 / 定性判断样本中待测物浓度。

 

信号系统原理（HRP + TMB 最常见）

绝大多数 ELISA 用这套：

1.酶：辣根过氧化物酶（HRP）。

2.底物：TMB（四甲基联ben胺），无色。

3.反应：HRP 催化 H₂O₂氧化 TMB → 生成蓝色可溶性产物。

4.终止：加硫酸（终止液），蓝色变为黄色，稳定。

5.读数：450 nm 测 OD（参考波长 630 nm）。

方法	主要检测对象	信息与浓度关系	适用分子大小	典型应用
双抗体夹心法	抗原（蛋白）	正相关（浓度高→色深）	大分子（多表位）	小分子、半抗原
直接法	抗原	正相关	大分子	抗原定性、包被验证
间接法	抗体	正相关	抗体	病毒抗体、自身抗体、免疫滴度
竞争法	抗原（小分子）	负相关（浓度高→色浅）	小分子、半抗原	类固醇激素、药物、多肽、毒素

一句话总结

双抗体夹心法：捕获抗体抓抗原，酶标抗体再夹心，色深 = 浓度高。

间接法：抗原抓样本抗体，酶标二抗放大，色深 = 抗体高。

竞争法：样本与酶标物抢结合位点，色浅 = 浓度高。

 

试剂盒的组成

结果判断

一、显色与 OD 值初判（肉眼 + 酶标仪）

显色观察：标准品孔应呈梯度显色（TMB 底物终止后由蓝变黄）；空白 / 阴性对照基本无色。 

OD 值质控（夹心法常用）：空白孔 OD ＜ 0.2 

最高标准品 OD ＞ 1.0 

样本 OD 需落在标准曲线范围内；超出上限→稀释重测；低于下限→浓缩或换高敏试剂盒 

二、标准曲线与对照验证（实验有效性）

标准曲线：相关系数 R² ≥ 0.99（越接近 1 越好） 

推荐用 四参数逻辑（4PL）拟合 

标准品 CV% ＜ 8% 

对照孔：阴性对照（NC）：背景低，过高提示非特异结合 

阳性对照（PC）：应有明显信号，无信号则实验失败 

样本重复性：复孔 CV% ＜ 10%（可靠）；10%–15% 可接受；＞15% 需重测 

 

 

三、结果判读方法

1. 定性判断（阴 / 阳）

计算 Cut-off 值（按试剂盒说明书，常见：NC 均值 + 2SD 或 NC×2.1） 

样本 OD ＞ Cut-off → 阳性 

样本 OD ＜ Cut-off → 阴性 

接近 Cut-off → 复测确认 

2. 定量判断（浓度计算）

用标准曲线将样本 OD 值换算为目标物浓度 

结果需在试剂盒检测范围内 

3. 半定量判断（效价 / 相对水平）

以最高稀释倍数仍呈阳性为效价，用于抗体滴度等 

 

四、常见异常与处理

高背景 / 花板：优化封闭、洗涤，降低抗体浓度 

无显色 / 显色过浅：检查底物、抗体活性，延长孵育 

曲线 R² 低 / 点偏离：排查移液、标准品稀释、孵育条件 

复孔 CV 大：规范加样、洗板，减少边缘效应

（图片仅供参考）

 

 

笃玛小科普：样本OD值超出标准曲线的线性区间时，如何进行稀释？

做 ELISA、蛋白定量、核酸检测等比色 / 发光实验时，你一定遇到过这种情况：辛辛苦苦做完实验，结果发现部分样本的 OD 值要么 "爆表" 超出标准曲线上限，要么低得几乎和空白差不多。直接报告 "无法定量" 太可惜，随便稀释又可能导致结果偏差巨大。