艾博抗Abcam Western Blot Marker P

【讨论】western blot 的疑问

anlise 刚做的western，跑分离胶时发现mark的条带被拖长了，原来的线性条带变成了长方形。 考虑哪些方面的原因呢？ selleckchemcials 1. 可能是电流太强了， 可以考虑把电压调低一点~ 2. 分离胶浓度有点低，可以考虑把换成高浓度的胶~ 做实验的时候，为了得到漂亮的图，一定不要介意多花时间~我有的时候为了让条带好看，170KD的蛋白都用12%的胶，跑上3小时呢~

操作篇：western blot 之封闭及杂交

封闭及杂交 在做杂交时，个人建议：还是使用杂交袋进行一抗和二抗的孵育，这样节约抗体。 操作开始： 1. 将膜用 TTBS 从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭 1 h。必要时可先用丽春红染色（2%乙酸，0.5%丽春红的水溶液）观察蛋白条带，再用去离子水和 TTBS 将丽春红洗脱后封闭，如用蛋白 marker 则可省略此步。 2. 将一抗用 PBST 稀释至适当浓度（在 1.5 ml 离心管中）；撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验

操作篇：western blot 之发光鉴定

Marker，进行分析与扫描。 2．AP-NBT/BICP 显色法： 每片 NBT/BICP 可溶解于 30 ml 水中，使用前将一片分装在 30 个 EP 管中，每张 3×9 cm 的膜取一管配成 1 ml 即可。将 PBST 或 TTBS 洗涤过的膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 NBT/BICP 溶液液滴上，并用不透明物体（如报纸）遮挡光线，显色 20 s 后每 10 s 观察一次，至条带明显或有本底出现时将膜揭起置去离子水中漂洗后放滤纸上晾干即可观察与扫描。