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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
39pg/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
78pg/mL-5000pg/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
通过特异性抗人SIGLEC10单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的SIGLEC10结合形成固相抗体复合物。加入HRP标记的检测抗体后,形成抗体-抗原-酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB转化为蓝色,酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与SIGLEC10含量成正比,酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数:
产品名称:人唾液酸结合Ig样凝集素10(SIGLEC10)ELISA试剂盒
英文名称:Human SIGLEC10 ELISA Kit
产品规格:48T/96T
检测样本:血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本。
检测范围:78.12pg/mL-5000pg/mL
灵敏度:39.06pg/mL
特异性:与人其他细胞因子无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃保存)。
检测流程:
1、固相抗体包被
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体(捕获抗体),该抗体能专一识别并结合人唾液酸结合Ig样凝集素10(SIGLEC10)中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合
将待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清)加入微孔中,样本中的SIGLEC10会与包被抗体结合,形成“固相抗体-抗原”复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
3、酶标二抗结合
加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的第二抗体(检测抗体),该抗体识别SIGLEC10的另一个独立表位,从而形成“捕获抗体-SIGLEC10-检测抗体”的三明治结构。
4、显色反应
洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物溶液。HRP催化TMB产生蓝色产物,在酸性终止液(如硫酸)作用下变为黄色。
5、定量分析
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与样本中SIGLEC10浓度呈正相关。
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(pg/mL) | 5000.00 | 2500.00 | 1250.00 | 625.00 | 312.50 | 156.25 | 78.13 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.694 | 1.553 | 0.782 | 0.488 | 0.292 | 0.169 | 0.099 | 0.032 |
| 校正OD值 | 2.662 | 1.521 | 0.750 | 0.455 | 0.260 | 0.137 | 0.067 | 0.000 |

1. 试剂准备
将试剂盒所有组分平衡至室温(20–25℃,≥30min);浓缩洗涤液按 1:19 稀释配制工作液。
标准品用标准品稀释液复溶,梯度稀释,配置系列浓度梯度标准溶液,备用。
2. 实验流程
加样:设置空白孔、标准孔、样本孔,每孔加入 100 μL 对应标准品 / 待测样本,封板,37℃恒温孵育 90 min。
洗涤:弃净孔内液体,每孔加满洗涤工作液,静置 30 s,甩干拍净,重复洗涤 5 次。
加酶结合物:每孔加入 100 μL HRP 标记检测抗体,封板混匀,37℃孵育 60 min。
洗涤:重复上述洗涤步骤 5 次,彻底拍干微孔。
显色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物显色液,轻柔混匀,37℃避光显色 15 min。
终止:按同等顺序每孔快速加入 50 μL 终止液,轻晃混匀,溶液由蓝转黄。
读数:15 min 内,酶标仪 450 nm 波长测定各孔 OD 值,拟合标准曲线计算样本含量。
3. 关键质控要点
全程孵育使用专用封板膜,防止液体蒸发、交叉污染。
洗涤充分为实验核心,残留洗液易造成背景偏高、假阳性。
TMB 显色液避光储存,现用现加,严禁接触氧化剂。
加终止液顺序需与显色加样一致,避免局部色差、绿色残留。
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| 人视网膜微血管内皮细胞 | 大鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒 |
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文献和实验抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig 分五类,即 IgG、IgA、IgM、IgD 和 IgE。与免疫测定有关的 Ig 主要为 IgG 和 IgM。Ig 由两个轻链(L)和两个重链(H)的单体组成。Ig 的轻链是相同的,有 κ(kappa)和 λ(Lambda)两种型别。五类 Ig 的重链结构不同,这决定了它们的抗原性也不同。IgG 和 IgM 的重链分别称为 γ(gamma)链和 μ(mu )链。 重链和轻链的 N 端的氨基酸排列顺序
ELISA是一种免疫测定。免疫测定(immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。一、抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后,可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中,抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的,称为半抗原(hapten)。例如某些激素、药物等。抗原的反应性取决于抗原
。ELISA作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43 ℃和2~8 ℃。 温育这一步是临床ELISA测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37 ℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37 ℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定
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