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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Rickettsia prowazeki Detection Kit (Real-Time PCR Method)
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T/盒
普氏-立克次体(RP)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
产品概述
产品名称:普氏-立克次体(RP)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
英文名称:Rickettsia prowazeki Detection Kit (Real-Time PCR Method)
检测原理:本试剂盒采用TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,针对普氏-立克次体基因高度保守区设计一对特异性引物和探针,利用相应仪器对 PCR 过程进行实时监测,实现检测结果的定性分析,用于科研实验中对可疑感染者的病原学检测。
主要用途:本试剂盒利用实时荧光定量PCR 原理,定性检测普氏-立克次体,对普氏-立克次体的诊断及疗效评估有重要指导意义。
适用样本:EDTA 抗凝全血、血清、蜱虫研磨液、组织样本等。
适用仪器:ABI 7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等荧光定量 PCR 仪。
产品规格与组成
包装规格 50T/盒
RP 反应液 500μL×2 管
酶液 50μL×1 管
RP 阳性质控品 50μL ×1 管
阴性质控品 250μL ×1 管
储存与有效期
储存条件:-20℃±5℃避光保存,避免反复冻融(≤5 次);运输采用干冰 / 冰袋。
有效期:12 个月(未开封、规范储存)。
试剂稳定性:开封后 2 周内用完;MasterMix 室温放置≤30min。
操作流程(25μL 体系)
样本处理:磁珠法 / 离心柱法提取核酸,洗脱至 50μL;-20℃保存或立即使用。
反应体系配制(冰上操作):
2×MasterMix:12.5μL
引物探针混合液:2μL
模板核酸 / 对照:4μL
无酶水:补至 25μL
PCR 扩增程序:
预变性:95℃,10min(1 循环)
扩增:94℃ 15sec → 55℃ 30sec(收集 FAM 荧光),40 循环
熔解曲线(可选):60–95℃,验证特异性。
结果判定:
阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;
可疑:检测通道 35
阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
质量控制
阴性质控品:Ct>38 或无 Ct 值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
注意事项
分区操作:样本处理、试剂配制、扩增区物理隔离,防污染。
耗材专用:使用无酶枪头、PCR 管,避免核酸酶污染。
仅限科研:按说明书使用,不可用于非法检测。
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文献和实验普氏-立克次体(RP)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
性更明显。最大者为斑点热群,为0.6×1.2um。在感染细胞内,立克次体常聚集成致密团块状,但也可成单或成双排列。不同立克次体在细胞内的分布不同,可供初步识别。如普氏立克次体常散在于胞质中,恙虫病立克次体在胞质近核旁,而斑点热群立克次体则在胞质和核内均可发现。 革兰氏染色阴性,但一般着染不明显,因此常用Giemnez、Giemsa 或Macchiavello法染色,其中以Gimenez法最好。该法着染后,除恙虫病立克次体呈暗红色外,其他立克次体均呈鲜红色。Giemsa法
株(Ⅰ相)和九里株(Ⅱ相)及普氏立克次体均为我室保存,嗜肺军团菌LP6,LP8抗原由大坪医院检验科惠赠,绿脓假单胞菌PN103株,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌由本室保存。 2.鼠抗Q热立克次体Ⅰ相单抗杂交瘤1B 1 D 4 D 8 (Ⅰ相ELISA效价>1∶12 800,Ⅱ相效价<1∶3 200)由本室自制。按文献[2]报道的方法标记成10 nm的胶体金探针。 3.用兔抗Q热立克次体免疫血清包被硝酸纤维素膜(NC
团块状,但也可成单或成双排列。不同立克次体在细胞内的分布不同,可供初步识别。如普氏立克次体常散在于胞质中,恙虫病立克次体在胞质近核旁,而斑点热群立克次体则在胞质和核内均可发现。 革兰氏染色阴性,但一般着染不明显,因此常用Giemnez、Giemsa 或Macchiavello法染色,其中以Gimenez法最好。该法着染后,除恙虫病立克次体呈暗红色外,其他立克次体均呈鲜红色。Giemsa法和Macchiavello法分别将立克次体染成紫或蓝色和红色。 立克次体
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