A549细胞hGALNT14基因敲除细胞株

「全能」与「功能」的邂逅

Cas 9 技术 从细菌的免疫系统，到一个众所周知的生物技术工具；从单一的一项敲除技术，到应用领域遍地开花，Cas9 技术发展不可谓不快。到底有多快？看到 13 年 14 年那么多关于 Cas9 的 nature、science、cell，我和我的小伙伴都惊呆了！ Cas9 技术广泛用于基因功能研究，到底有多广泛？说全能，我想不过分吧。不信？那就听我说说。 研究基因功能，最常用的方法就是基因敲除、上调表达、下调表达、融合蛋白及做突变。说到基因敲除，这是

手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因

刺激培养液 100 ul 每孔，不要超过 5 天。14. 当细胞密度超过 30%, 或者克隆长得足够大，将它转移到 24 孔板中继续培养。 重复 6 - 8 步。15. 步骤 5 中剩余的细胞长到 50% 密度时, 继续有限稀释进行单克隆化培养。也可以冻存起来留置后用。评估脱靶效应脱靶的情况在网址 (http://crispr.mit.edu/.) 上评估。这个网站上列举上很多潜在的脱靶位点。把这些位点通过 PCR 的方法扩增出来进行 PCR 产物测序。如果没有发现建立好基因敲除细胞株有明显的脱靶情况

G418原代细胞的筛选

氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。Ｇ418的这一选择特性，已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。在进行转染时细胞膜受到影响，抗生素可能对细胞产生较大影响，加上G418有杀菌作用，所以有人主张转让时不加其它抗生素。其实G418本身有很好的杀菌效果，在用G418进行筛选的过程中很少会发生污染。但有一点，其实我觉得问题也不是很大，那就是：在老外的一本实验手册中提到，在脂质体转染时所用培养基中最好不加任何抗生素。我想他的想法