人载脂蛋白F(APOF)ELISA试剂盒

检测原理：
通过特异性抗人APOF单克隆抗体包被于微孔板，与样本中的APOF结合形成固相抗体复合物。加入HRP标记的检测抗体后，形成抗体-抗原-酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质，加入TMB底物显色，HRP催化TMB转化为蓝色，酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与APOF含量成正比，酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数：
产品名称:人载脂蛋白F(APOF)ELISA试剂盒
英文名称:Human APOF ELISA Kit
产品规格：48T/96T
检测样本：血清，血浆，细胞培养上清及其他生物学样本。
检测范围：0.94ng/mL-60ng/mL
灵敏度：0.47ng/mL
‌特异性‌：与人其他细胞因子无交叉反应。
‌有效期‌：6个月（2-8℃保存）。
检测流程：
1、固相抗体包被‌
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体（捕获抗体），该抗体能专一识别并结合人载脂蛋白F(APOF)中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合‌
将待测样本（如血清、血浆或细胞培养上清）加入微孔中，样本中的APOF会与包被抗体结合，形成“固相抗体-抗原”复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
‌3、酶标二抗结合‌
加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的第二抗体（检测抗体），该抗体识别APOF的另一个独立表位，从而形成“捕获抗体-APOF-检测抗体”的三明治结构。
4、显色反应‌
洗涤去除未结合的酶标抗体后，加入TMB底物溶液。HRP催化TMB产生蓝色产物，在酸性终止液（如硫酸）作用下变为黄色。
5、定量分析‌
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），颜色深浅与样本中APOF浓度呈正相关。
数据及参考曲线：

操作步骤：
一、试剂准备‌
所有试剂使用前平衡至室温（18–25℃）；
洗涤液按比例稀释（如10×稀释为1×）；
标准品用稀释液复溶并进行倍比稀释（如0、0.5、1、2、4、8 ng/mL）。
‌二、加样‌
设立标准孔、样本孔和空白孔（仅加稀释液）；
每孔加入50 μL标准品或待测样本；
可对血清/血浆样本进行1:2预稀释以减少基质干扰。
三、温育‌
封板后37℃温育60分钟，使抗原充分结合；
温育期间避免阳光直射。
四、洗涤‌
弃去孔内液体，每孔注入300–350 μL洗涤液；
静置30秒至1分钟，甩干，重复5次；
拍干微孔板，避免残留液滴影响后续反应。
‌五、加酶标抗体‌
每孔加入100 μL生物素化检测抗体；
37℃避光温育60分钟。
‌六、再次洗涤‌
同上法洗涤5次，确保彻底清除未结合抗体。
‌七、加HRP-亲和素‌
每孔加入100 μL HRP标记亲和素；
37℃避光温育30–60分钟。
八、第三次洗涤‌
再次洗涤5次，拍干。
‌九、显色‌
每孔加入显色剂A和B各50 μL（或TMB单组分90–100 μL）；
37℃避光显色15–30分钟，观察颜色变化。
‌十、终止反应‌
每孔加入50 μL终止液，轻轻震荡混匀；
溶液颜色由蓝变黄，立即进行测定。
‌十一、读数与分析‌
使用酶标仪在450 nm波长下测定OD值；
以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线；
将样本OD值代入方程，计算TPS浓度。‌
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