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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
上海经科化学科技有限公司
- 服务名称:
FISH(单标)+IF6标扫描全套
- 规格:
张
一、服务简介
技术原理与解决痛点
二、服务核心优势
- 单张切片可完整留存核酸与六种靶蛋白多组荧光信号,有效规避荧光淬灭、多荧光染料互相串色干扰;
- 配套 TSA 酪胺信号放大技术,放大阳性信号,检测灵敏度更高,同源、异源一抗均可使用;
- 高分辨率全景成像,以 DAPI 信号为对齐基准,采用 0.5 像素高精度重合算法匹配各轮扫描画面,融合图像组织匹配完整、检测结果精准;
- 配套轻量化图像浏览分析软件,普通办公电脑即可读取全景文件,一键输出共定位细胞数量、阳性比率、细胞密度等量化参数,无需高端服务器硬件。
三、完整标准实验流程
- 样本准备
- 热修复处理
- 蛋白酶 K 消化处理
- 核酸片段 FISH 标记
- DAPI 复染细胞核并封片
- 切片高清全景扫描,留存 FISH 通道原始图像
- 拆除盖玻片,洗脱核酸探针
- 专用荧光淬灭设备清除 FISH 荧光基团
- 抗原修复
- 内源性过氧化物酶封闭处理
- 血清封闭
- 第一种一抗孵育
- HRP 标记二抗孵育
- iF488-TSA 荧光标记
- 抗体洗脱液洗脱本轮一抗、二抗
- 循环执行血清封闭、一抗、HRP 二抗、TSA 标记、抗体洗脱整套流程,依次完成第二至第六种靶蛋白染色;每轮结束后均执行 DAPI 复染、封片、全景扫描、清除荧光基团操作
- 全部轮次实验完成后,软件对所有扫描图像开展高精度融合处理
四、样本适配与送样运输规范
- 石蜡切片常温保存运输;冰冻切片 - 20℃保存运输。
- 细胞爬片、细胞滴片、细胞涂片不适用本方案:拆除盖玻片易造成细胞脱落,多轮扫描无法保证视野完全重合,图像无法正常融合。
- 实验全程切片组织形态结构必须保持一致,否则各轮扫描图像无法匹配融合。
五、交付成果
FISH(单标)+IF双标扫描全套
FISH(单标)+IF3标扫描全套
FISH(单标)+IF4标扫描全套
FISH(单标)+IF5标扫描全套
FISH(单标)+IF6标扫描全套
FISH(单标)+IF7标扫描全套
FISH(单标)+IF8标扫描全套
FISH(单标)+IF9标扫描全套
FISH(单标)+IF10标扫描全套
FISH(双标)+IF单标扫描全套
FISH(双标)+IF双标扫描全套
FISH(双标)+IF3标扫描全套
FISH(双标)+IF4标扫描全套
FISH(双标)+IF5标扫描全套
FISH(双标)+IF6标扫描全套
FISH(双标)+IF7标扫描全套
FISH(双标)+IF8标扫描全套
FISH(双标)+IF9标扫描全套
FISH(双标)+IF10标扫描全套
FISH(三标)+IF单标扫描全套
FISH(三标)+IF双标扫描全套
FISH(三标)+IF3标扫描全套
FISH(三标)+IF4标扫描全套
FISH(三标)+IF5标扫描全套
FISH(三标)+IF6标扫描全套
FISH(三标)+IF7标扫描全套
FISH(三标)+IF8标扫描全套
FISH(三标)+IF9标扫描全套
FISH(三标)+IF10标扫描全套
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文献和实验')2 Fragment(Invitrogen) 上述试剂均由嘉美生物代买。 实验仪器:激光共聚焦扫描显微镜(LeicaTCS-SP5型) 实验步骤: 将细胞每孔2ml(密度为2*106/L)传至激光共聚焦专用培养皿;接种24h后,采用刺激物处理;25min后培养皿内细胞培养液,PBS冲洗3次,2-4%甲醛固定15min;1×PBS缓冲液(0.01M,pH7.4)洗涤3次,每次5min,滴加非免疫山羊血清(内含0.3%Triton X-100)封闭液,覆盖液面2-3mm,室温放置60min,除去
脱水,之后用过氧化氢对组织进行漂白,清除溶液中含有 DCM、DBE 等,防止组织产生气泡和氧化。此种方法操作简单,但是过氧化物清除的弊端在于破坏组织完整性,会使成像结果略模糊,DCM、DBE 也会一定程度上猝灭荧光信号。iDISCO+ 常用于 10.5-16.5 天的小鼠胚胎的透明。iDISCO+ 与开发的 clearMAP 成像分析技术结合改善了成像水平,并且软件开源性使得数据分析更加容易。图 6:iDSCO\3DISCO 与 iDISCO+步骤区别图 7:小鼠全脑经透明后 LSFM 扫描
实现。 光栅的原理: 为解决滤光片系统不可随时改变波长的问题,光栅型酶标仪就应运而生。它是使用物理性衍射光栅原理在不同的角度把白光光源分开成独立的波长,之后再经过一系列的狭缝把已选取的激发波长分出来,并照射到样本上。样本的发射光也被同样的原理去分隔出需要的波长,最后被检测器接收和量度。 光栅的好处: 光栅系统的好处就是可随意选择波长和进行波长扫描,这方便了使用者。现今大部份的研究单位都设有公用平台,把一些高端的仪器集中一起管理,高端的多功能酶标仪也是其中之一。光栅型
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