山羊传染性胸膜肺炎（CCPP）核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

山羊传染性胸膜肺炎（CCPP）核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

产品概述
检测对象：山羊支原体山羊肺炎亚种（Mccp），致山羊传染性胸膜肺炎（CCPP）。
检测原理：TaqMan 探针法实时荧光 PCR，靶向 Mccp 高度保守基因（如 16S rRNA）。
用途：用于山羊肺组织、胸腔积液、鼻拭子等样本中 Mccp 核酸的定性 / 定量检测，仅科研用。
优势：快速（2–3h 出结果）、灵敏（低至 100 拷贝 / 反应）、特异（无交叉反应）、可定量。

产品规格与组分（50 次 / 盒，20μL 体系）
组分    规格    包装    备注
2×Probe qPCR MasterMix    0.5mL    本色盖    含 Taq 酶、dNTP、缓冲液、Mg²⁺
引物 - 探针干粉    50 次    棕色管    FAM 标记探针，BHQ-1 淬灭
阳性对照（Mccp DNA）    50μL（10⁷拷贝 /μL）    黄盖管    无传染性 DNA 片段
模板稀释液    1mL    绿盖管    标准品稀释用
无酶超纯水    1mL    蓝盖管    体系补足用
说明书    1 份    —    —

技术参数
检测限：≤100 拷贝 / 反应。
线性范围：10¹–10⁶拷贝 /μL，R²≥0.99。
特异性：不与其他支原体、羊常见致病菌交叉反应。
荧光通道：FAM（检测）。
反应体系：25μL。
温控程序：
预变性：95℃，2min；
40 循环：95℃ 15s → 60℃ 30s（采集荧光）。
结果判读：
阴性：无 Ct 或 Ct≥40；
阳性：Ct＜40，典型 S 型扩增曲线；
可疑：35≤Ct＜40，建议复检。

样本类型与处理
适用样本：肺组织、胸腔积液、鼻拭子、咽拭子、全血 / 血清、环境拭子。
核酸提取：用 DNA 提取试剂盒；提取后 4℃≤8h，-20℃长期保存。

操作流程（20μL 体系）
试剂准备：引物 - 探针干粉加 162μL 超纯水溶解，-20℃分装保存；冰上融化所有试剂，离心收集。
标准品稀释：阳性对照 10 倍梯度稀释至 10⁶–10¹ 拷贝 /μL（6 个浓度）。
体系配制（冰上）：
2×MasterMix：10μL；
引物 - 探针混合液：3μL；
模板（样本 / 对照 / 标准品）：7μL；
总体积：20μL。
上机扩增：按温控程序运行，60℃采集 FAM 荧光。
结果分析：标准品 Ct 值绘标准曲线，样本 Ct 值计算浓度；定性判读阳性 / 阴性。

质量控制
阳性对照：Ct＜40，典型扩增曲线，实验有效。
阴性对照：无 Ct 或 Ct≥40，无扩增曲线，无交叉污染。
标准曲线：R²≥0.99，扩增效率 90%–110%。

运输与保存
运输：干冰 / 冰袋低温运输。
保存：-20℃避光，有效期 2 年；避免反复冻融。

注意事项
分区操作：试剂配制、样本处理、PCR 扩增分三区，防污染。
试剂专用：不同批号试剂不混用，引物 - 探针避免强光。
样本处理：新鲜样本优先，反复冻融≤3 次；操作符合生物安全规范。