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20 μl反应×100次
| RR092A | 定量PCR专用快速反转录试剂盒PrimeScript™ FAST RT reagent Kit with gDNA Eraser | PrimeScript™ FAST RT reagent Kit with gDNA Eraser |
| 产品介绍: |
| ■ 制品内容 (Code No.: RR092A: 20 μl反应×100次量) Code No. RR092S RR092A 1. 8X gDNA Eraser Premix *1 80 μl 200 μl 2. 5X RT Premix *2 160 μl 400 μl 3. RNase Free H 2 O 1 ml 1 ml×2 4. EASY Dilution II(for Real Time PCR) *3、4 1 ml 1 ml *1:8X gDNA Eraser Premix成分是后续反转录反应所必需的,请务必进行基因组DNA的除去反应。含有RNase Inhibitor。 *2:含有dNTP mixture、Oligo dT Primer和Random 6 mers。 *3:制作标准曲线时梯度稀释total RNA和cDNA的稀释液。如果用水或TE Buffer稀释,往往不能准确地进行稀释,但使用EASY Dilution II (for Real Time PCR) 时,即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释。请注意,本制品不影响反转录和PCR反应,用其稀释后的样品可直接使用。 *4:可以单独购买EASY Dilution II (for Real Time PCR) (Code No. 9451) ■ 制品说明 PrimeScript FAST RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。试剂盒中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser,42℃,2 min即可除去基因组DNA,之后添加含有完全抑制DNA分解活性成分的反转录反应试剂,进行10分钟的反转录反应。由于基因组去除试剂和反转录反应试剂预先进行了预混化,因此,通过向RNA样品中依次添加试剂的简便操作,可以毫无损失地进行从基因组DNA去除到cDNA合成的反应。 本试剂盒尤其适用于存在基因组残留问题的Real Time RT-PCR分析,例如无法设计合适引物的单外显子基因或没有大内含子的基因,以及由于假基因的存在无法避免基因组来源的非特异性扩增时。 使用本制品合成的cDNA适用于嵌合荧光法和探针法qPCR分析。可以根据实验目的,选择与TB Green ® Premix Ex Taq ™ II FAST qPCR(Code No. CN830S/A)、TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (CodeNo. RR420A/B)、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 、Probe qPCR Mix, with UNG (Code No. RR392S/A/B)等定量PCR试剂组合使用。 ■ 保存 -20℃。 ■ 特长 1.在短短15分钟内完成从去除基因组DNA到cDNA合成的反应。 2.只需依次添加预混试剂的简便操作,即可进行反应。 3.通过单管反应可以从模板RNA中毫无损失地合成cDNA。 4.Random 6 mers和Oligo dT Primer作为反转录引物,预先包含在5X RT Premix中,可以均匀地合成RNA的全部区域。 5.本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution II(for Real Time PCR),将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。 ■ 使用注意 1.使用本制品合成的cDNA与TB Green关联制品组合使用时,建议使用以下TB Green Premix系列。 与本制品组合使用,可以得到可信度高的结果。 TB Green Premix Ex Taq II FAST qPCR(Code No. CN830S/A) TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B) TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B) 本制品与TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 组合使用时,有时反应性能不好,不推荐使用。 2.8X gDNA Eraser Premix和5X RT Premix前在使用前需颠倒混匀,轻轻离心后使用。 3.分装试剂时务必使用新的枪头(Tip),以防止样品间污染。 定量PCR专用 快速反转录试剂 ■ 相关视频: qPCR操作注意事项-混匀操作 |
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| 实验例1-三种PrimeScript试剂盒cDNA合成量比较 实验例2-Total RNA混有基因组DNA的去除效果 |
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